%多聚甲醛溶液的配制方法.docVIP

4％多聚甲醛溶液配制方法 -------------------------------------- 4％多聚甲醛溶液用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。 4％多聚甲醛溶液配制方法：1) 900 ml dd H20 + 500 ul 1N NaOH 2) Heat to 65-70℃3) While stirring, add 40 g paraformaldehyde4) Continue heating and stirring until paraformaldehyde is dissolved 5) Let cool to room temperature6) Add 100 ml of 10X PBS7) pH to 7.3 with HCl8) Sterile with filter9) Store at 4℃, protected from light 称量2g，放置与50ml pbs中，37度孵箱2天后，4%的多聚甲醛就配好了。 配制0.1M的PBS，PH=7.2-7.4,100mlPBS+4g多聚甲醛，放入65℃水浴，一般半天左右就可以溶好。 因为需要现用现配所以一般就配10毫升。 用一个带盖的玻璃离心管加0.4克多聚甲醛，加8毫升PBS，加1毫升2N的NAOH，放到60度的水浴里，10分钟，拿出来用手颠倒几次，基本上就都溶了，再用HCL调ph到7.2，最后定容就行了，我最快10分钟搞定。 取4g 多聚甲醛溶到100 PBS缓冲液，加2滴1N的NaOH（pH7.4）,60度水浴磁力搅拌，大约1-2小时可以溶解。 4%多聚甲醛溶液的配制: 在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风橱中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温,调整PH值为7.4,使用前新鲜配制. 常用的固定剂种类很多,固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性.固定剂可分为两类:有机溶剂和交联剂.有机溶剂如乙醇和丙酮能够去处脂 类物质使细胞脱水,把蛋白质沉淀在细胞结构上.交联剂如多聚甲醛一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来,形成一个相互交联的抗原网.许多人发现用交联剂 固定细胞效果较好,尤其是做免疫荧光的时候,当然没有固定的规则可言.不过,单独用多聚甲醛固定的细胞不能使抗体进入细胞内,因此,标本固定后必须用非离 子去污剂(triton-x 100)透化标本. 4％多聚甲醛溶液（PFA）配制 称取40gPFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60－65℃,使成乳白色悬液。用1.0mmol/L 的NaOH调PH至7.0使呈清亮状（滴加），再加入约500ml 2×PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中）。可再检测一下PH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃（保存备用）。 注意：1.配制时应在通风条件下操作，并避免接触皮肤及吸入（戴口罩及手套），因PFA有较强的毒性，对粘膜及皮肤有刺激作用。2.加热时，温度不可过 高，常为60－65℃。否则PFA降解失效，配制好的PFA虽可有效一点时间，但过久的液体，固定效果下降，应用前新鲜配制。 除了用DEPC水配制PFA外，也可以用灭菌蒸馏水或经DEPC或外源RNA酶清除剂处理的0.01－0.1％/L的PBS配制，方法及主要事项同上。