杂交三倍体太平洋牡蛎群体的染色体数目组成观察.pdf

谖毽曩n‘ 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 杂交三倍体太平洋牡蛎群体的染色体数目组成观察+ 姜波 王昭萍米 于瑞海李慷均术 (中国海洋大学，青岛市鱼山路5号，266003) 摘要： 本文通过染色体计数法对2龄杂交三倍体太平洋牡蛎群体的染色体数目组成进行了 分析，发现在80个具良好中期分裂相的牡蛎中，有56个三倍体(70．0％)；12个非整倍体 的生长差异不明显(P0．05)。可能由于数量较少的原因，嵌合体和二倍体的生长没有表现明 显生长滞后(P0．05)。 关键词： 三倍体；二倍体；非整倍体；嵌合体；生长 目前的三倍体育苗方法主要有抑制受精卵第二极体释放和通过四倍体与二倍体杂交两 种方法。其中四倍体被认为是三倍体产业化发展的关键，因为利用四倍体与二倍体杂交理论 上可以产生100％的三倍体…。染色体作为细胞遗传学研究的核心，在贝类多倍体的研究中 具有重要的意义。目前对多倍体的染色体组成研究大多局限于诱导三倍体和诱导四倍体产生 的个体上，对杂交三倍体成体的染色体组成的研究则很少。Wang[2]在90个1龄杂交三倍体 中发现了18个非整倍体(20％)，1个嵌合体。杂交三倍体太平洋牡蛎群体的染色体数目组 成研究有利1J二研究三倍体的遗传学基础。f：DI止L，有必要对杂交三倍体太平洋牡蛎的染色体组 成进行研究，以探讨其遗传基础。 本研究以2龄的杂交三倍体太平洋牡蛎为材料，研究了杂交三倍体的染色体组成，以期 能够为多倍体育种在理论和实际应用等方面提供依据。 1材料和方法 1．1材料 本实验所用材料为2001年5月通过四倍体雄体与二倍体雌体杂交生产的三倍体牡蛎，经 海上筏式养殖而成。 1．2方法 投喂少最的单胞藻，维持牡蛎的基本需要，抑制生理活性。低温抑制1个月左右后，将牡蛎 移至22～24℃的升温海水中，连续充气，每曰投喂单胞藻3～4次，保证牡蛎有足够的营养。 培养3～4天，促使细胞旺盛分裂。将调节生理活性的牡蛎放入秋水仙素浓度为O．005％的含 +863高技术项目资助(2004AA623820) 4通讯作者。Email：zpwang@ouc．edu．ell 244 覆建蠢n’ 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 单胞藻的海水中，连续充气。处理8～lOhr后，将牡蛎取出，并进行测量。 通过滴片法制各染色体标本，分别取每个牡蛎的消化盲囊和鳃部共约0．5mL，经 滴片法制片，自然干燥。以Leishman染剂染色，油镜下观察，发现分散好的中期分裂相后计 数染色体的数目。 假设每个牡蛎体内细胞的染色体数目是一致的，正常的二倍体细胞中含有20条染色体， 三倍体细胞中含有30条染色体，_二倍体和三倍体都是整倍体，含有其他数目的染色体的个 体则为非整倍体。整倍体牡蛎个体的染色体数目是通过5～10个具有相同染色体数目，且分 散良好．无明显染色体缺失或获得的中期分裂相确定的，非整倍体个体则需要至少10个分 散良好并具相同数目染色体的中期分裂相确定。 2结果 2．1杂交三倍体的染色体组成 本实验共取样97个牡蛎进行染色体制片分析，其中仅对80个具良好中期分裂相的牡蛎 作了染色体计数，其他17个因为中期分裂相较少，未做计数分析。在80个染色体计数个体 (3n+1)条染色体的超三倍体。中期分裂相见图1。 表1 2龄杂交三倍体牡蛎的染色体组成 Table1 Chromosomeinmated after2 culture compositiontriploidoysters years A B C D 图l太平洋牡蛎的二倍体、三倍体及非整倍体的中期分裂相 A3n=30：B3n+1=3l：C3n—l=29：D2n=20 from and Pacific Fig．1Representativemeta