枇杷种质资源ISSR反应体系的优化.pdf

枇杷种质资源ISSR反应体系的优化 吴锦程1杨向晖2林顺权2 (1福建省莆田学院环境与生命科学系福建莆田351100；2华南农业大学园艺学 院广州510642) sequencerepeats，简单重复序列中间区域)扩增多态性是由 ISSR(inter-simple Zietldewicz等创建的一种新型的微卫星类分子标记技术。采用真核生物广泛存在简 单重复序列(simple 反向排列的间隔不大的重复序列间的基因组片段，通常在引物的5’或37末端加 几个非重复的锚定碱基以保证引物与基因组DNA中SSR的57或37末端结合。 ISSR通常为显性标记，具有较高的稳定性和多态性，DNA用量少，技术要求不高， 成本低廉，且扩增时退火温度比较高保证了PCR扩增的可重复性。真核生物富含 SSR且变异快。因此ISSR标记技术可以检测基因组多位点的差异，在果树上已显 示出巨大的应用潜力。目前，枇杷上尚未见利用ISSR的报道。 要得到重复性好、条带清晰的ISSR扩增式样，往往易受诸多因素的影响而未 能成功，如引物与dNTPs用量、MgCl2的浓度等都会影响扩增式样。因此对ISSR 体系的优化显得十分重要，本实验对枇杷ISSR反应体系的优化进行研究以期为枇 杷种质资源的分子生物学研究提供技术支持。 采用CTAB一蛋白酶K法提取了枇杷种质的DNA，以835引物，以西班牙枇 杷品种Ullera为模板，对枇杷种质ISSR反应体系进行优化研究，结果表明：250L 反应体系中，Taq 适宜浓度或用量分别是：M92+为3．0mmol／L，TaqDNA聚合酶为1．2U，引物为 利、西班牙、日本、阿尔及利亚和中国的48份枇杷种质进行ISSR扩增，经琼脂糖 电泳获得了清晰的扩增图谱(图1，图2)。 67 图1引物835在48份枇杷种质中的ISSR扩增式样 (14)Marc(15)Ullera(16)Crisanto 荣本(22)大红袍(23)夹脚(24)硬条白砂 图2引物1135在48份枇杷种质中的ISSR扩增式样 (48)晚钟 山里本(45)茂木(46)梅花霞(47)香钟11号