枸杞多糖组分LBGP3对老年小鼠T淋巴细胞凋亡的影响.pdf

枸杞多糖组分LBGP3 对老年小鼠T 淋巴细胞凋亡的影响 邓洪斌 李电东 中国医学科学院 中国协和医科大学 医药生物技术研究所 北京 100050 摘要 目的 探讨枸杞多糖组分 3 LBGP3 对老年小鼠 T 细胞凋亡的影响 方法用 IL-2 与ConA 刺激诱导凋亡 流式细胞术检测凋亡率 琼脂糖凝胶电泳观察DNA 梯 带 放射免疫分析和ELISA 方法测定IL-10 和IFN-? 含量 RT-PCR 检测其mRNA 变 化 Western Blot 检测FLIP caspase8 和Bcl-2 蛋白变化 结果LBGP3 作用老年T 细胞6 18 32h 后 都可使其凋亡率 DNA 梯带的比例增加 IFN-? 的含量及其mRNA 表达量增加 IL-10 的含量和其mRNA 表达量降低 凋亡相关蛋白FLIP caspase8 和Bcl-2 蛋白的表达量降低 结论 LBGP3 通过使老年T 细胞发生Th2 向Th1 的转变 和降低凋亡相关蛋白FLIP caspase8 和Bcl-2 蛋白的含量的方式来提高老年T 细胞 对凋亡的敏感性 关键词 LBGP3 Lycium barbarum glycopeptide 3 老年小鼠 T 淋巴细胞 细胞凋 亡 Th1/Th2 细胞因子 细胞凋亡是一种由基因控制的细胞自主性死亡方式 它对于维持多细胞基体的完 整性和自身稳态具有重要作用 淋巴系统中 T淋巴细胞的发育及功能发挥与细胞凋 1 亡密切相关 免疫细胞受到刺激发生增殖后常常通过凋亡来清除具有代谢缺陷或自 身免疫性的细胞 以调节T细胞针对刺激原的反应 维持增殖稳态 选择性地清除衰 老的 功能缺陷的T细胞有助于防止其在生命体内的积累 凋亡在衰老T细胞中的变化 目前说法不一 说明除年龄外 衰老T细胞的凋亡变化还受其他多种因素的影响 如 种 株 器官 培养系统以及刺激原的差异等等 我们以前的研究表明 老年小鼠周 围T淋巴细胞经活化刺激后表现出凋亡抗性[2] 枸杞多糖组分3 Lycium barbarum glycopeptide 3 LBGP3 是从枸杞子中分离得 到的一种生物活性物质 有研究证实LBGP3可明显增强小鼠脾细胞的增殖反应 3 目 前有关LBGP3对细胞凋亡方面的研究报道较少 本研究以老年小鼠T淋巴细胞为研究 对象 试图从细胞凋亡的角度阐明LBGP3对老年T细胞的免疫作用机制 材 料 与 方 法 1. 主要试剂与用品 刀豆蛋白A ConA IL-2 PI 以及蛋白酶抑制剂leupetin aprotinin 和pepstatin 均为Sigma 产品 RPMI-1640 为GibcoBRL 产品 Hyclone 血清 总RNA 提取试剂盒 1 购自Promega FLIP 多克隆抗体购自美国NeoMarkers 公司 Bcl-2 caspase8 actin 多克隆抗体购自中山公司;尼龙纤维购自济南化纤厂 IFN-? 试剂盒购自晶美公司 IL-10 试剂盒购自北京福瑞生物工程公司 RT-PCR 试剂盒购自Inveitrogen 公司 2. 实验动物 C57BL/6J 小鼠购自中国医学科学院实验动物中心 实验所用青年小鼠为2 月龄 老年小鼠为24 26 月龄 3. 枸杞多糖组分 LBGP3 的分离 3 枸杞子购自北京同仁堂 参照文献分离得到 LBGP3 HPLC 分析为单一对称峰 分子量为 8.5x104 LBGP3 的糖成分由阿拉伯糖 和半乳糖以 1 1 的比例组成 4 4. T细胞的分离 与刺激 将尼龙纤维用双蒸水冲洗 烘干后塞入5 ml玻璃注射器内 高压灭菌 拉椎处死 小鼠 无菌取脾 放入完全RPMI-1640培养液中 在不锈