某市水源水中有机提取物的类雌激素作用研究.pdf

某市水源水中有机提取物韵类雌激素作用研究 王霞 张宇洁蒋颂辉 张国州 殷丽红 朱惠刚 屈卫东· (复旦大学公共卫生学院环境卫生学教研室 上海 200032) 摘要 为研究水中有机提取物的类雌激素活性．采用出生17天的ICR雌鼠做子宫增重实验。比较子宫湿重 变化。观察H．E染色组织切片中子宫上皮细胞高度和腺体数目．并应用免疫组化ABC法检测增殖细胞核抗原 Cell Nuclear (Proliferating Antigen．PCNA)的表达。结果发现：各粥■组阊子宫湿重瓤腺体数且的变化不明 显。但上皮细胞高度随剂量增高有较为明显的增高。PCNA在阳性对照及高翔量缉表达明显，低剂量维及阴性对 照表达不明显或无表达。提示：本研究检测水样可能具有雌激素活性。 关键字：子宫增重 内分泌干扰物PCNA类雌激素作用 dis— 按照美国环保局“内分泌干扰物甄别与测试委员会”的定义，内分泌干扰物(endocrine chemicals／endocrine rupting 代或(亚)群引起有害效应的外源性物质。由于绝大部分的EDCs具有干扰雌激素的作用，故有 学者将这些具有干扰雌激素作用的化学物称为环境雌激素(EnvironmentalEstrogens，EEs)。 一般来说，人体暴露于内分泌干扰物质的途径除了食品的直接摄取以外，另一个重要的途径是来 自于水的摄取。 S入水，水质受到越来越严重的污 随着工农业的不断发展，人口的持续增长，大量的ED 染。这些有害物质被人和动物通过饮水摄入体内，通过各种作用方式，包括干扰激素的合成和 代谢，模拟内源性激素作用等来影响机体的正常代谢、生殖、发育等功能。近年来人类精子数 量下降、某些水生动物发生性别畸形及隐睾、尿道下裂等疾病发生率上升，推测可能就是环境中 的这些化学物质所致。因此，水中有机提取物内分泌干扰活性的检测和研究是十分必要和迫 切的。 本次实验利用子宫增重实验，H．E染色组织切片中子宫上皮细胞高度和腺体数目的变化，及免 CellNuclear 疫组化ABC法检测增殖细胞核抗原(ProliferatingAntigen，PCNA)的表达，研究 菜市水源水中有机提取物的类雌激素作用。 1材料与方法 1．1实验动物 出生17天的ICR雌鼠(由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供)。 1．2实验试剂 17D一雌二醇(1 mousemonoclonal 7目一estradiol，E2，Sigma)、市售玉米油、anti—PCNA 3,3’一diaminobenzidine(DAB，Amresco) 1．3实验方法 第一作者王霞，复旦大学环境毒理学专业硕士研究生。 30)。 基金项目：国家高科技研究发展计划863专项金费支助(No．2002AA60ll ．·———104--—— x 玻璃柱(25cm115cm)过滤吸附有机物，过柱前树脂需用有机溶剂清洗干净。吸附在树脂上的有 机物用40ml 30％甲醇一丙酮洗脱液洗脱，洗脱液置45℃水浴挥于后，用100％甲醇再溶，定容至6ml， 待用。 l 1．3．2子宫增重实验7天断奶ICR雌性小鼠完全随机分组，每组5只。以玉米油为溶剂对照， 水为空白对照，17目一雌二醇溶于玉米油(100 lag／kg／d，10lag／kg／d)为阳性对照。有机提取物同样 以玉米油为溶剂，设立5个剂量组，分别相当于人饮水量8L／d，4L／d，2L／d，lL／d，0．5L／d所含有机 物。各受试物剂量组及对照组自l7天开始经颈背部皮下注射染毒。每天一次，连续三天(17、 18、l9天)。第四天(20天)早上，颈椎脱臼处死小鼠，记录体重，解剖分离子宫