人胰岛素原基因突变体的构建.PDF

第 26 卷第 19 期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 26 , No. 19 　　　　 　　　　 1714 2004 年 10 月 ACTA 　ACADEMIAE 　MEDICINAE 　MILITARIS 　TERTIAE Oct. 2004 ( ) 论著 　　　 文章编号 2004 人胰岛素原基因突变体的构建 1 1 2 1 1 1 3 1 兰丽珍 ,邓华聪 , 孙 　辽 , 郑 　丹 , 郑宏庭 ,刘东方 , 弓军胜 　　( 重庆医科大学附属第一医院内分泌科 , 重庆 400016 ; 山西医科大学第一医院:2 肾病科 , 3 整形科 ,太原 030001) 　　提 　要 : 目的 　完成人胰岛素原基因的定点突变 ,使之能在普通细胞中被 Furin 蛋白酶识别去除 C 肽分泌成熟胰岛 ( ) 素。方法 　采用 PCR 体外定点突变技术 PCR sitedirected mutagenesis , PCRSDM ,设计 4 对引物 , 引入 5 个 Furin 识别的突 变位点 ,通过重叠延伸法 PCR 扩增 ,使人胰岛素原编码基因 B10 密码子由 CAC 突变为 GAC ; C3 密码子由 GAA 突变为 AAA ;C4 密码子由 GCT 突变为 CGT;C32 密码子由 CTT 突变为 CGT ,将扩增片段克隆入 T 载体并测序。结果 　DNA 测序结 果表明在预期位点突变符合要求。结论 　应用 PCR 诱导突变技术 ,在体外能准确、简便有效的诱导胰岛素原基因突变 ,使 体外应用非内分泌细胞构建高效分泌成熟胰岛素的细胞克隆成为可能。 　　关键词 : 人胰岛素原 ;PCR ;定点突变 　　中图法分类号 : R347. 8 ; R39433 ; R394. 3 　　　 文献标识码 : A Construction of a mutant human proinsulin gene LAN Lizhen1 , DENG Huacong1 , SUN Liao2 , ZHENG Dan1 , ZHENG Hongting1 , LIU Dongfang1 , GONGJunsheng3 　　 (1 2 Department of Endocrinology , First Affiliated Hospital , Chongqing University of Medical Sciences , Chongqing 400016 ; Department of Renal Dis 3