第六章胚胎培养讲义.ppt

第六章 胚胎培养 第六章 胚胎培养 本章教学目的与要求 (1)掌握胚培养和胚乳培养的操作步骤； (2)了解胚珠培养和子房培养的操作步骤。 种子的结构 第一节、胚培养 胚培养：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 二、培养过程： 1、幼胚培养过程： 取子房 常规表面消毒 解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。 固体培养 幼胚的发育方式： 1）胚性发育； 2）早熟发育； 3）产生愈伤组织 2、成熟胚培养过程---以玉米成熟胚培养为例 1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的培养皿中培育6hr。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成幼苗。 胚龄与胚培养的关系 胚龄与胚培养的关系 三、培养基与培养条件 1、培养基 2、培养条件： 1）糖类： 2）附加成分 3）光照 4）培养方式： 幼胚培养适于液体培养， 成熟胚适于固体培养 糖的主要作用 幼胚早熟萌发 适于胚胎培养的附加物 光照条件 四、胚培养的应用 1)在远缘杂交育种中:克服杂种胚不能正常发育 2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率 3)缩短育种周期 4)测定休眠种子的萌发率 5)理论研究中的应用 第二节、胚乳培养 胚乳外植体制备:种子消毒---取出胚乳 培养:White或MS诱导培养基---25-27℃--暗或弱光 发育:诱导形成愈伤组织----再分化形成胚状体或不定芽---生根培养----植株。 胚乳植株染色体数目的检查 取根尖、幼叶或愈伤组织 0.2%-0.5%秋水仙素碱溶液在25℃浸泡4-8hr 流水冲洗5-10min 卡诺氏液或FAA液固定 1mol盐酸，60 ℃水浴8-10min 染色、压片、镜检、计数 二、培养基与培养条件 培养基 White 和 MS 培养条件 1、胚的影响：带胚的胚乳产生愈伤组织比不带 胚的高 2、辅助生长物质：2,4_D 玉米素等 3、天然提取物：20%番茄汁、葡萄汁、玉米汁、椰乳、水解酪蛋白、酵母提取物促进胚乳培养 4、蔗糖：小麦8%，枸杞5% 5、ph：4.5-6.5 6、光照：10-12h黑暗和光照交替 7、温度：24-26℃ 三、胚乳再生植株的染色体倍数 稳定型：三倍体 畸变型：除少数是三倍体，多数是由多种倍性细胞组成的嵌合体 四、胚乳培养的应用 1、胚乳培养可得到三倍体植株，产生无籽果实。或加倍形成六倍体植株进行育种。 2、胚乳培养可得到倍性不同的愈伤组织，可分离和筛选各种类型的非整倍体植株。 第三节 胚珠和子房培养 一、胚珠培养 定义：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 胚珠培养类型： （二）、培养基：White,Nitsch,MS 二、子房培养 定义：子房培养是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 （一）子房培养的培养过程 1、制备外植体：在开花前后适宜时期取子房或幼花，消毒 2、子房培养：固体或液体培养均可 性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细胞）----胚状体或愈伤组织----单倍体植株； 体细胞（珠被、子房壁）---胚状体或愈伤组织----二倍体植株； 三、胚珠和子房培养的应用 （二）子房培养的应用 1、授粉子房培养目的：挽救杂种胚 2、未授粉子房培养目的：获得单倍体植株。 本章小结： (1)胚胎培养包括：幼胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、子房培养和胚乳培养等。 (2)胚胎培养的意义。 (3)离体胚培养方法：成熟胚和幼胚培养。 (4)未成熟胚培养，三种不同的生长方式，胚性发育；早熟萌发；形成愈伤组织。 (5)胚培养的作用。 (6)检查胚珠植株的染色体数目的方法。 (7)分析胚珠培养和子房培养的发育途径。 （一）胚珠培养的应用 1、受精胚珠培养目的： 一是打破种子的休眠； 二是挽救胚的发育，以获得杂交种。 2、未受精胚珠培养目的：获得单倍体植株。 * * 大 家 好 ！ 胚胎培养是指将植物的胚胎与母体分离，培养在人工的培养基上形成幼苗的过程，包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。 胚培养 胚乳培养 胚珠和子房培养 本章内容 胚胎培养的意义： 胚的发育 玉米成熟胚的培养 胚乳培养是指将胚乳从母体上分离出来，在无菌的环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 一、胚乳培养过程 胚乳培养过程 胚乳 胚状体发育成苗 不定芽苗 愈伤组织 形态发生 倒