土壤中分解尿素的细菌的分离和计数_上课用解剖.ppt

五.课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红——美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现深紫色，并且有金属光泽，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。 大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 本课题知识小结: 六、例题解析 例1．对细菌群体生长规律测定的正确的表述是 A．在液体培养基上进行 B．至少接种一种细菌 C．接种一个细菌 D．及时补充消耗的营养物质 解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。 答案：A 之后讲课本P22的最上面内容 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + CO2 NH3 +H2O 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 1、实例： 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 问：如果请你寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？ DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶（930C）。 ㈠.筛选菌株 问：为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来？ 水生耐热细菌Taq：美国科学家布鲁克于1966年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现，并分离出耐高温的TaqDNA聚合酶。 原因：因为热泉温度70～800C，高温淘汰了绝大多数微生物（不耐热），只有Taq细菌被筛选出来。 【研究思路】 （一）筛选菌株 原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 有选择作用 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；配置合适的培养基 方法： ⑴抑制大多数微生物生长 ⑵造成有利于该菌生长的环境， 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。 2、实验室中微生物的筛选原理： 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 选择培养基 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能利用尿素作为氮源而生存。 缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、该培养基如何将分解尿素的细菌选择出来？ 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 目 的 是否涂布接种 培养基类型 组别 是 是 牛肉膏蛋白胨 培养基 对照组 以尿素为唯一氮源的选择性培养基 实验组 分离尿素细菌 用以判断选择性培养基是否具有选择性 对设计实验的训练 对照组 牛肉膏蛋白胨培养基 实验组 以尿素为氮源的培养基 【统计菌落数目】 常用方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法， 还可以用过滤膜法 1、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法） （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 1个菌落 = 1个活菌 稀释涂布平板法。 （2）