第四章香豆素讲义.ppt

* 实训 2．鉴定 （1）显色反应：将上述分得的七叶内酯和七叶苷各少许，分别加1ml甲醇溶解，做下列试验，观察颜色变化，纪录。 ①将上述试液各1滴，分别滴于滤纸上，于254nm的紫外灯下观察荧光，然后，在原斑点上滴加1滴10%氢氧化钠溶液，观察荧光颜色变化。 ②上述试液，分别加入7%盐酸羟胺甲醇溶液2~3滴，再加1%氢氧化钾甲醇溶液2~3滴，水浴加热数分钟，至反应完全，冷却，再用盐酸调配pH 3~4，加1%三氯化铁试液1~2滴，溶液呈红~紫红色。 * 实训 （2）薄层色谱鉴别 样品：自制七叶内酯和七叶苷分别用少许甲醇 溶解制成样品溶液。 对照品：七叶内酯、七叶苷的甲醇溶液。 薄层板：硅胶H-CMC-Na板 展开剂：甲苯-乙酸乙酯∶甲酸（5∶4∶1） 显色剂：在紫外光下观察，记录斑点的位置， 或用重氮化对硝基苯胺喷雾显色。 * 实训 项目二： 补骨脂中香豆素的提取分离与鉴定 [实训目的] 能根据溶解性采用溶剂法从补骨脂中提取香豆素成分 能熟练进行回流、连续回流、减压蒸馏、抽滤、色谱等操作 能通过分离补骨脂内酯和异补骨脂内酯， 熟悉干柱色谱法的操作技术 能正确判断薄层色谱、显色反应的结果 [实训器材] 补骨脂种子粗粉 70%乙醇 石油醚 中性氧化铝 氢氧化钠溶液 稀盐酸 7%盐酸羟胺甲醇溶液 10%氢氧化钾甲醇溶液 1%三氯化铁试液 硅胶H-CMC-Na 苯 石油醚 丙酮 回流装置、分液漏斗、常压蒸馏装置、抽滤装置、薄层色谱、干柱色谱等设备 * 实训 [操作原理] 补骨脂中的香豆素主要是补骨脂内酯和异补骨脂内酯，属于游离的呋喃香豆素，亲脂性较强。本试验利用补骨脂中香豆素易溶于有机溶剂，水中溶解度小的性质，用乙醇，将其从药材中提取。利用二者极性的不同，通过氧化铝干柱色谱进行分离。 [操作步骤] 补骨脂香豆素的提取:如下 * 实训 补骨脂种子粗粉100g 用70%乙醇回流提取3次， 每次用乙醇200ml ,40min 乙醇提取液 减压蒸馏至原体积的1/4，放置析出沉淀，抽滤 沉淀 拌入纯净的细砂，干燥，置索氏提取器中，用石油醚连续回流提取 石油醚提取液 回收石油醚至干，用10～15ml乙醇洗涤转移至50ml三角瓶中，放置，析出结晶，抽滤 黄色结晶（补骨脂总香豆素） * 2．补骨脂香豆素的分离 取色谱用中性氧化铝12g，装于直径1.0cm×28cm的色谱柱中。将补骨脂总香豆素0.2g溶于少量甲醇，用0.5g氧化铝吸收，60℃烘干，加到柱的顶端，用苯-石油醚（4﹕1）（每50ml加丙酮15滴）做洗脱剂，洗脱至柱低，置紫外灯下观察，用刀片切取两段蓝色荧光带，分别用甲醇回流提取，过滤，滤液回收溶剂至小体积，洗净，滤取结晶即为补骨脂内脂和异补骨脂内脂。 * 3．鉴定 （1）开闭环试验：取少许样品分别加稀氢氧化钠溶液1～2ml，加热，观察现象，再加稀盐酸几滴，观察现象。 （2）荧光试验：取样品少许，分别溶于少量氯仿中，滴于滤纸上，于254nm的紫外灯下观察荧光。 （3）异羟肟酸铁试验：上述结晶少许，置试管中，分别加入7%盐酸羟胺甲醇溶液2~3滴，再加10%氢氧化钾甲醇溶液2~3滴，水浴加热数分钟，至反应完全，冷却，再用盐酸调配pH 3~4，加1%三氯化铁试液1~2滴，观察溶液颜色。 * 3．鉴定 （4）薄层色谱鉴别 样品：自制异补骨脂素内脂和补骨脂素内脂的乙醇溶液 对照品：补骨脂素内脂和异补骨脂素内脂的乙醇溶液 薄层板：硅胶H-CMC-Na板 展开剂：苯-石油醚（4︰1）（每50ml加丙酮15滴） 显色：紫外灯下观察荧光 * 返回题 单项选择题答案： 1. A 2. B 3. A 4. C 5. A 6. D 7. B 8. C 9. C 10. D * 返回题 多项选择题答案 BCE 2. ADE 3. ABCD 4. BD 5. ACDE 6. ACD 7. CD 8. AD 9. ABD 10. ABDE * 返回题 问答题答案： 1．答：香豆素类化合物结构中具有内酯环，在热碱液中内酯环开裂成顺式邻羟基桂皮酸盐，溶于水中，加酸又重新环合成内酯而析出。 在提取分离时须注意所加碱液的浓度不宜太浓，加热时间不宜过长，温度不宜过高，以免破坏内酯环。碱溶酸沉法不适合于遇酸、碱不稳定的香豆素类化合物的提取。 * 返回题 问答题答案： 2.答 将上述四成分分别溶于乙醇溶液中