微生物学基本操作技术解剖.ppt

菌株代数 美国药典（USP）中规定：“将微生物接种至一新鲜培养基上/内，每萌发一次即称为一代，”并规定“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”。 United States Pharmacopoeia (USP) provides that: to microbial inoculation to a fresh medium on / in each germination time is referred to as a generation, and provides that strains of the passages (from the original strain from freeze-dried powder) must not exceed 5 generation. “ 我国的GMP认证中也如此要求，并且中国药典2005年版药典也已做出“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”这个明确的规定。 Chinas GMP certification is asking, and the Chinese Pharmacopoeia 2005 edition of Pharmacopoeia also had a strain of the passages (from the original strain from freeze-dried powder) should not exceed 5 on behalf of The clearly defined. Enrichment (G1) Separation of single-olony(G2) Working strain (W3) Working strain (W4) Working strain (W5) 标准菌株提供形式 Accuracy Easy of Use (preparation) High Low Complicated Easy Quanti Cult (REMEL) Standard Strains (ATCC/NBRC etc.) EZ-CFU one step (MicroBioLogics) KWIK-STIK (MicroBioLogics) Culti Loops (REMEL) BioBall (BTF/bioMerieux)  质控菌株 Primary strain Qualitative strain Quantitative strain 视频材料 质控菌株的使用 质控菌株 制订专门菌种保藏管理制度； 同一株菌种采用两种以上保藏方法保存； 对只能采用一种保藏方法的菌株备份存放于两个以上的保藏设备中； 对菌种的入库和出库记录入档，实行双人负责制管理； 设专人负责管理菌种保藏设施正常运行，定期检修维护。 五、微生物保藏 微生物菌种保藏方法 基本原理是在挑选优良纯培养物并使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境，使其长期保存后仍能保持菌种原有的优良特性。 基本措施是低温、真空、干燥。 五、微生物保藏 常用菌种保藏方法 定期移植法 液体石蜡法 真空冷冻干燥法 -80℃低温冻结法 液氮超低温冻结法 定期移植法 亦称传代培养保藏法，指将菌种接种于适宜的斜面培养基上，最适条件下培养，完成培养于4～6℃进行保存并间隔一定时间（3-6个月）进行移植培养的一种短期菌种保藏方法。 操作步骤： 斜面制备 接种 培养 保藏 斜面制备 培养基配制 分 装 灭 菌 摆放斜面 接 种 培养 细菌37 ℃ ，1-2d 酵母 28~30℃，2~3d 丝状真菌26 ℃，5~7d 保藏 4~6℃ 保藏3~6个月 培养和保藏 定期移植法 操作简单，使用方便； 对设备和人员要求不高； 可随时使用，便于观察菌种； 工作劳动强度大，属短期保藏，保藏成本高； 菌种传代频繁，易退化、污染。 液体石蜡法 指将菌种接种在适宜的斜面培养基上，最适条件下培养好后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于低温（4～6℃）干燥处进行保存的一种菌种保藏方法。 操作步骤： 液体石蜡预处理 斜面培养物制备 灌 注 石 蜡 保 藏 优质化学纯液体石蜡 灭菌： — 121℃湿热灭菌30min，蒸发水分； — 160 ℃干热灭菌2h； 冷却至室温。 液面高出斜面顶部1cm 4～6 ℃，干燥处； 直立放置； 保藏时间1 ～2年。 液体石蜡法 操作简单，使用比较方便； 对设备要求不高，对人员操作水平有一定要求；· 菌种易退化、污染。 真空冷冻干燥法 指将保藏的菌种细胞或孢子悬浮于保护剂中