凝集反应与沉淀反应合编.ppt

大家按下图打孔加样 * * 凝集反应与沉淀反应 一、目的要求 了解抗原抗体反应的原理及常用技术 掌握凝集反应、沉淀反应的概念及原理 掌握血型鉴定凝集反应（试管法）及双向琼脂扩散和对流免疫电泳的原理和操作技术 1.材料 抗A血清，抗B血清，碘伏，载玻片，采血针，棉签，牙签 2.实验原理 血型指红细胞膜上特异性抗原的类型，在ABO血型系统中血型是根据红细胞膜上有无A B两种特异性抗原来划分的。红细胞只含A抗原的称为A型，只含B抗原称为B型。同时含有A B两种特异性抗原的称为AB型。A B两种特异性抗原都不含的称为O型。因此利用抗A与抗B血清中针对A B两种抗原的特异性抗体并通过观察抗原与抗体结合时的产生的凝集反应即可初步判断血型 3. 实验方法 （1） 取载玻片一张用笔划分为两格并编号 （2） 在两格中分别滴入抗A与抗B血清 （3）用碘伏将左手无名指消毒后，迅速用采血针扎一下采 血，将血滴入分别加入了抗A与抗B血清的方格中并用牙签混匀 （4） 30s后观察判定实验结果 血型鉴定 实验结果 有凝集物出现者为阳性，用+表示；无凝集物出现者为阴性用-表示。 O ﹣ ﹣ AB ﹢ ﹢ B ﹢ ﹣ A ﹣ ﹢ 血型 抗B 抗A 1.材料 伤寒沙门菌H诊断菌液，1﹕10伤寒沙门菌免疫血清；生理盐水，小试管，吸管，试管架等。 2.实验原理 凝集反应是一种抗原抗体反应，当抗原与其特异性抗体相遇结合形成抗原抗体复合物时，便可出现肉眼可见的凝集现象。所以利用这一特性便可以鉴定未知的抗原，阳性反应强度一般用 + 的数量表示，一定条件下可以用凝集反应做半定量测定。 3. 实验方法 （1） 取小试管8只，依次编号后，每管加入0.5ml生理盐水 （2） 吸取1﹕10 稀释伤寒沙门菌免疫血清到第1管中，洗吹3次使之充 分混匀，在吸出0.5ml加入第2管，依次对倍稀释至第7管，自第7管吸出0.5ml弃去，第8管不加血清作为对照。 （3）吸取0.5ml H诊断菌液加入上述试管中 （4）振荡试管，使试管中液体充分混匀后放入37摄氏度 恒温箱中过夜 第二天观察结果。 试管法凝集反应 试管凝集加样程序 对照 1/2562 1/1280 1/640 1/320 1/160 1/80 1/40 血清稀释液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 伤寒沙门菌菌液 ----- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 伤寒沙门菌免疫血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 生理盐水 8 7 6 5 4 3 2 1 单位：ml 实验结果 先勿振动试管，首先观察生理盐水对照管，正确的结果是观察试验管应自第一管开始底沉淀物呈圆形，管边缘整齐；轻轻振荡，细菌分散后呈均匀混浊，即未出现凝集现象。若出现了非特异性凝集现象。则本次实验无效。 观察试验管应自第一管开始。H菌液凝集物呈疏松棉絮状，沉于管底，轻轻摇时即易离散和升起。根据凝集反应程度，分别以以下记号表示： ++++ 管内液体澄清，细菌完全被凝集于管底 +++ 管内液体轻度混浊，细菌大部分被凝集于管底，凝集块较小 ++ 管内液体中度混浊，仅有少量细菌凝集 + 管内液体很混浊，仅有少量细菌凝集 - 管内液体与对照管相同，无凝集 凝集效价的判断：与相应菌液发生++凝集反应的血清最高稀释浓度为该被检血清的凝集效价 1.材料 琼脂液，待测血清（未提供），肝癌患者AFP阳性血清（阳性对照），生理盐水（阴性对照），AFP诊断血清（含AFP抗体），载玻片，打孔器，毛细滴管 2.实验原理 AFP诊断血清中含有AFP的特异性抗体，肝癌患者阳性血清中含有AFP抗原作为阳性对照，当待测血清中含有AFP抗原时，就会和AFP诊断血清中的AFP特异性抗体发生抗原抗体反应，