细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒.pdfVIP

? 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 产品编号 产品名称 包装 P0033 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 100次 产品简介： ? 碧云天的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便地从 培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质 网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。 ? 本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞 膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。 ? 约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS， Western 、酶活性测定等后续实验。 ? 膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响 的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。 ? 本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 P0033-1 膜蛋白抽提试剂A 100ml P0033-2 膜蛋白抽提试剂B 30ml — 说明书 1份 保存条件： -20oC保存，一年有效。 注意事项： ? 需自备PMSF 。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(ST506)可以 向碧云天订购。 ? 使用本试剂盒抽提到的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA 法蛋白浓度测定试剂盒 (P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。抽提获得的细胞膜蛋白不适合用Bradford法测定蛋白浓度。 ? 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 ? 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 准备试剂：室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B ，融解后立即置于冰浴上。取适量的膜蛋白抽提试剂A和B备用，在使用前 数分钟内加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM。 2. 准备细胞或组织样品： a. 对于细胞 (1) 收集细胞 对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液 处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰 酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。 对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。 (2)?洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4oC ，600g离心5分钟沉淀细 胞。弃上清，随后4oC ，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。 (3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF 的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰 浴放置10-15分钟。 b. 对于组织：取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1毫升临用前添加了PMSF 的膜蛋白抽提试 剂A ，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。注：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg， 后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。 3. 细胞或组织样品的破碎及破碎效果的鉴定：把细胞悬液或组织样品转移到一适当大小的冰浴预冷玻璃匀浆器