肝素琼脂糖磁珠操作流程.pdfVIP

肝素琼脂糖磁珠 操作流程 （以纯化人血浆中抗凝血酶Ⅲ为例） BeaverBeadsTM Magrose Heparin 1. 样品处理：取人血浆1 mL 加入至1.5 mL EP 管中，接着加入500 μL Binding Buffer ，充分混匀。 2. 磁珠预处理：将Magrose Heparin 磁珠漩涡振荡30 s，使磁珠充分重悬；取1 mL 10% （v/v ）磁珠悬液 产品简介 置于另一新的1.5 mL EP 管中。对磁珠悬液进行磁性分离，弃上清液，用1 mL Binding Buffer 洗涤2 次， BeaverBeadsTM Magrose Heparin 磁珠具有快速的磁响应性、丰富的肝素密度、极高的物理化学稳定 磁性分离，管中磁珠可直接用于抗体分离。 性等特点。一方面，可作为亲和层析的配基，能够与生长因子及抗凝血酶 AT Ⅲ等生物分子发生特异性 3. 蛋白吸附：在步骤 2 预处理的磁珠管中加入步骤 1 处理的样品溶液，漩涡振荡均匀，在室温下（约 结合；另一方面，由于表面带有大量负电性硫酸根离子基团，可作为一种阳离子交换介质，在一定 pH 25°C ）将 EP 管置于垂直混合仪混匀 15~30 min ，使样品和磁珠充分接触并吸附，然后进行磁性分离， 条件下，与带正电的蛋白具有强的结合能力。 移弃上清液。 与传统柱层析纯化方式相比，Magrose Heparin 磁珠无需对粗蛋白样品进行预处理（如：反复繁琐的 4. 磁珠洗涤：向EP 管中加入1 mL Binding Buffer ，漩涡振荡重悬磁珠1 min 后进行磁性分离，移弃上清 离心，费时费力的过滤操作），此外，无需控制流速及柱压，不需要昂贵的层析设备。对于熟练的操作 液；该操作重复3 次。 者来说，在很短时间内就能完成高纯度目的蛋白的提取，且能轻松实现多个样品的平行处理，实现高通 量的蛋白纯化。 注意事项：根据对洗脱蛋白 SDS图谱，在Binding Buffer 中可适当加入一定浓度NaCl ，该步骤 适用于抗凝血因子 III 、凝血因子、核酸结合蛋白、脂蛋白、干扰素、类固醇受体、凝血酶及类凝 可有效的去除非特异性吸附蛋白，使操作者获得更高浓度的目标蛋白。 血酶等生物大分子的分离纯化。 5. 蛋白洗脱：在上述完成磁珠洗涤的EP 管中加入0.2 mL Elution Buffer ，用移液器吹打或者涡旋振荡下 迅速重悬，然后在室温下（约 25°C）将 EP 管置于垂直混合仪混匀 10~15 min 后进行磁性分离，收集 产品信息