温阳补肾药对抗骨髓间充质干细胞凋亡的实验研究.pdf

中医正骨2013年2月第25卷第2期 (总083) ·3· · 基础研究 · 温阳补肾药对抗骨髓间充质干细胞凋亡的实验研究 杨黎丽 ，黄胜杰 ，李媚 ，王和鸣 (1．福建中医药大学，福建 福州 350003；2．马来西亚南方大学，柔佛 新山 81300) 摘 要 目的：探讨温阳补肾药对骨髓间充质干细胞凋亡的影响及作用机制。方法：建立白细胞介素 1B诱导体外培养的sD大 鼠骨髓间充质干细胞凋亡体系，分别向其中加入巴戟天含药血清(A组)、鹿角胶合药血清(B组)、淫羊藿含药血清 (C组)、骨碎 补含药血清(D组)和空白血清(F组)，E组不加入血清。各组细胞培养48h后，采用RT—PCR法检测bcl一2和Bax的mRNA表达 量，采用电泳法检测骨髓间充质干细胞凋亡体系的建立，采用WesternBlot法检测bcl一2和Bax的蛋白表达量。结果：①骨髓间充 质干细胞表面标记结果。流式细胞仪检测结果显示CD 、CD5表达阴性，cD9。表达阳性。②bcl一2和Bax的mRNA表达量。各组 bcl一2mRNA表达量比较，差异有统计学意义(22．25-4-1．15，15．18±1．51，15．36±0．72，16．12±0．95，16．79±1．39，16．02±1．14； F=182．000，P=0．000)。A组bcl一2mRNA表达量高于B组、C组、D组、E组和F组(P=0．000，P=0．000，P=0．000，P=0．000， P=0．000)；E组高于B组(P=0．030)。各组BaxmRNA表达量 比较，差异有统计学意义(19．17±0．67，15．37±1．02，18．18± 0．23，17．37±0．72，28．36±0．93，23．52±1．26；F=28．422，P=0．000)。A组BaxmRNA表达量高于B组和D组(P=0．001，P= 0．018)，低于E组(P=0．001)；B组低于C组、E组和F组(P=0．013，P=0．000，P=0．000)，B组与D组比较，差异无统计学意义 (P=0．052)；D组低于F组(P=0．000)；E组高于C组和F组(P=0．000，P：0．000)。③bcl一2DNA和BaxDNA电泳结果。电泳 图谱显示，E组条带与A组、B组、c组、D组有明显差异。④bcl一2和 Bax的蛋白表达量。各组bcl一2蛋白表达量比较，差异有统 计学意义 (11526．18±697．38，20096．88±953．73，16784．88±504．36，14856．65±546．90，8549．29±313．63，9004．79 399．12；F=341．740，P=0．000)。A组bcl一2蛋白表达量低于B组、c组和D组 (P=0．000，P：0．000，P=0．000)，高于E组和F 组 (P=0．000，P=0．ooo)；B组高于C组、D组、E组和F组 (P=0．000，P：0．000，P=0．000，P=0．000)；C组高于D组、E组和F 组(P=0．000，P=0．000，P=0．000)；D组高于E组和F组(P=0．000，P=0．000)。各组Bax蛋白表达量比较，差异有统计学意义 (12435．09±1002．35，4590．96±71．45，11721．90±855．08，10393．54±662．79，13874．83±541．16，12774．15±674．40；F= 136．305，P=0．000)。A组Bax蛋白表达量高于B组和D组(P=0．000，P=0．039)；B组低于c组、D组、E组和F组(P=0．000， P=0．000。P=0．000，P：0．000)；C组低于E组(P：0．010)；D组低于E组和F组 (P=0．000，P=0．002)。结论：温阳补肾药含 药血清有对抗白细胞介素 1O诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的作用，其机制主要是上调抑制凋亡基因Bcl一2的表达，下调促进凋 亡基因Bax的表达，抑制其蛋白酶活性从而降低细胞凋亡率。 关键词 细胞凋亡 温补肾阳 骨髓间充质干细胞 Mechanism ofaction ofwarmingrecuperatingkidneymedicineagainsttheapoptosisofbonemarrow stem cells HUANGSheng-fie ，YANGLi-li，LIMei，WANGHe—ming．FujianUniversit