游离脂肪酸对3T3-L1细胞IL-6 mRNA及蛋白表达的影响.pdf

江苏农业科学 2013年第41卷第2期 一 25一 袁继红，朱 意，付家忠．游离脂肪酸对3T3一L1细胞IL一6mRNA及蛋白表达的影响[J]．江苏农业科学，2013，41(2)：25—27 游离脂肪酸对3T3一L1细胞 蛋白表达的影响 袁继红，朱 意，付家忠 (华中农业大学生命科学技术学院，湖北武汉430070) 摘要：用不同种类游离脂肪酸(FFA)处理体外培养成熟的3T3一L1脂肪细胞 ，用实时荧光定量 PCR和ELISA分 析FFA处理前后 IL一6mRNA和蛋白质水平的表达差异。结果表明：各类脂肪酸对 IL一6mRNA的表达均具有上调 作用，并且各种脂肪酸显著影响IL一6蛋白的分泌。 关键词：脂肪酸；白细胞介素一6；基因表达；脂肪细胞 中图分类号：Q75 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)02—0025—03 白细胞介素一6(interleukin一6，IL一6)是一种促炎症因 MasterMix购于TOYOBO公司；小鼠白介素6(IL一6)ELISA 子，参与到多种疾病如心血管疾病、肥胖、Ⅱ型糖尿病等发生、 试剂盒购于上海信然生物技术有限公司。 发展过程之中…。IL一6可由多种细胞产生，包括血管内皮 1．2 方法 细胞、活化的白细胞、平滑肌细胞及脂肪细胞等 ]。正常人 1．2．1 333一L1前脂肪细胞培养和诱导分化 根据文献[9] 的脂肪组织分泌 IL一6，而肥胖患者脂肪组织 IL一6的分泌量 中的方法，在 37℃、5％CO：条件下，将 3T3一L1前脂肪细胞 会显著增多，可达循环中IL一6总量的25％，肥胖是引起循环 用完全培养液 (高糖DMEM +10％FBS+100U／mL青、链霉 中IL一6升高的主要因素 。由于在肥胖和Ⅱ型糖尿病患者 素)进行培养，每2d换液 1次，直至细胞完全融合后2d(第 中IL一6表达水平呈上升趋势，因此 IL一6与胰岛素抵抗的 0天)开始诱导分化，将培养液换成含0．5mmol／LIBMX、 程度呈一个非常密切的正相关 。脂肪酸与肥胖和糖尿病 10mg／L胰岛素和 1I~mol／L地塞米松 的完全培养液进行培 关系密切，流行病学调查研究显示：空腹的高游离脂肪酸是诱 养，2d后使用只含有10mg／L胰岛素的完全培养液，再过2d 发Ⅱ型糖尿病的危险因素，且独立于年龄、性别、体脂百分比、 后使用不含任何诱导剂的完全培养液，以后每2d换完全培 胰岛素介导的葡萄糖摄取等 o“J。Boden 研究表明，与肥胖 养液 1次，直至第8～10天经油红0染色鉴定，有9o％以上 病和胰岛素抵抗高胰岛素血症联系的重要环节可能是体内异 细胞已分化为成熟的脂肪细胞时即可进行试验。 常增多的空腹血清游离脂肪酸。本试验用不同类型的脂肪酸 1．2．2 脂肪酸的处理 处理3T3一L1脂肪细胞，旨在探讨不 同类型游离脂肪酸 1．2．2．I FFA溶液的配制 将脂肪酸于37℃摇动水浴 (FFA)对成熟脂肪细胞 IL一6表达的调控作用。 中溶于无水乙醇，制成 1．0mmol／L的使用液；再将上述脂肪 酸使用液加入2％FAFBSA的DMEM培养液中，制成相应浓 1 材料与方法 度的脂肪酸培养液，过滤除菌。将分化成熟的333一L1脂肪 1．1 试验材料 细胞(第9天)，先置于含0．2％FAFBSA的DMEM培养液培 3T3一L1前脂肪细胞株购于 中国科学院上海细胞库； 养 12h，然后更换无血清、含一定浓度脂肪酸的DMEM 于培 DMEM(高糖)细胞培养粉购 自Gibco公司；特级胎牛血清购 养箱中孵育至指定时间。 于杭州四季清生物制品公司；分化诱导剂 1一甲基