溴化乙锭的新应用均相检测羟自由基的新型荧光探针.pdf

2006年l1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 溴化乙锭的新应用：均相检测羟自由基的新型荧光探针 石立杰1，杨春丽1，黄萍2，李东辉2+ (i．厦门大学生命科学学院：2．厦门大学医学院抗癌研究中心，厦门361005) 近年来国内外已有文献报道测定·OH自由基的方法，如液相色谱法、电子自旋共振法、荧 光法、比色法等，其中气相色谱法、电子自旋共振法虽然准确度高，但所用仪器昂贵、操作复杂， 不能广泛应用。荧光法测定的准确性、灵敏度均优于比色法，因此具有广阔的前景。国内曾有报 道根据荧光猝灭来间接检测羟自由基，但由于荧光猝灭的影响因素很多，在一定程度上影响了检 测的准确度。我们发现，在经典的羟自由基发生系统一fenton反应体系中加入溴化乙锭，体系荧 光行为发生显著改变，其发射波长大幅蓝移(80nm)，据此，建立了以溴化乙锭为荧光探针的 羟自由基均相荧光检测新方法。 1原理 荧光化合物，从而实现对羟自由基均相荧光检测。 2实验方法 ml 羟自由基的测定：在3ml的比色管中依次加入1 5mmol／L硫酸亚铁溶液，140mmol／L的过氧化氢溶液，混匀， lmg／ml溴化乙锭溶液、138p1 p11 迅速用三次水定容。反应30rain后进行光谱分析与测定。 羟自由基清除率的测定：在上述体系中，加入一定量的羟自由基清除剂后，测定体系荧光强 除率D可以下公式计算：D=(Fs-Fo)／(Fo—F)×100％。 3结果与讨论 Emissionandexcitationofethidiumbromideanditsreation Fig．1 spectrua product takenaftera (a)emiSsionspectrumofEB；(b)excitationspectrumofEB；(c)emissionspectrum reaction； takenafterareaction． (d)excitationspectrum ·通讯联系人 200 2006年n月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 图1是EB的荧光发射光谱，最大激发波长为480nm，最大发射波长为620nm。在羟自由 基存在时，其荧光峰发生显著蓝移，最大激发波长移至434am，最大发射波长移至530nm(图 lC、d)。本文据此建立了羟自由基均相荧光检测新方法。并考察了反应条件(pH、温度、各试 剂的用量等)的影响。 我们还将以上建立的检测方法应用于常见羟自由基清除剂甘露醇、抗坏血酸、硫脲对羟自由 基清除行为的考察，同时亦进一步验证本法的可行性。结果表明，本法能很好地反映羟自由基清 除剂对羟自由基的清除效果，上述清除剂对羟自由基的清除均呈现明显的量效关系(图2)。 4 0 0e 口T O 09 0 02 D3 0 5 8 l 柏●…0●n怕口●n●f●柏Vinlo effecton·OHradicalantioxidants thismethod by Fig，2Scavenging by analysed a．ascordic acid