土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt.ppt

[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]制定计划 三、操作提示 四、结果分析与评价 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？ 对照的培养皿无菌落说明培养基没有污染。 牛肉膏培养基的菌落数目多余选择培养基的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、课题背景(理论基础) 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + CO2 2NH3 + H2O 3、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌 一.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 一、研究思路 (一)筛选菌种 1 实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 启示： PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 寻找目的菌种时要根据它对_______________，到相应的环境中去寻找。 生存环境的要求 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 Taq细菌 筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，使耐热的Taq细菌保留下来。 2、实验室中微生物的筛选原理（同实例）： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 菌株：菌株又称品系，表示任何由一个独立分离的单细胞(或单个病毒粒子)繁殖而成的纯种群体及其后代。因此,一种微生物的每一个不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： ①在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 培养基选择分解尿素的微生物的原理： 培养基中尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶分解尿素的微生物才能生长、发育、繁殖 ②从物理性质看此培养基属于哪类？功能上属于哪类？ 固体培养基、选择培养基 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。但实际实验中有些细菌可以以其他细菌代谢产生的废物生长，因此需进一步鉴别 4 选择培养基： 在微生物学中，将允许______________________，同时_________________________生长的培养基。 特定种类的微生物生长 抑制或阻止其他种类微生物 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养分离。 5、怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 实验流程： 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察 菌落计数 二、实验设计 土壤取样 制备培养基 （一）土壤取样 从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 注意◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。操作要在火旁（称、装、稀释等） “微生物的天然培养基” 数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌 （二）制备培养基 制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基 相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 （对照作用） 思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ [三]样品稀释 注意：◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆稀释倍数为 101 ～106。初次范围宽些稀释101 ～107，稀释试管按梯度排序,并编号 ㈣.取样涂布 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 103、104、105 放线菌 102、103、104 真菌 保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 104、105、106 细菌 目的 稀释倍数 原因：不同微生物在土壤中含量不同 看课本P22，并讨论你认为这两位同