二十六章急胃肠炎病毒.pptVIP

第二十六章 急性胃肠炎病毒 腹泻是其主要症状。病因有四个病毒科： （1）呼肠病毒科的轮状病毒； （2）杯状病毒科的人类杯状病毒； （3）腺病毒科的肠道腺病毒； （4）星状病毒科的星状病毒。 抵抗力 RV抵抗力较强，在粪便中能存活数天 到数周，耐乙醚、耐酸碱，在pH3.5— 10仍可保持其感染性。56℃30min可被 灭活。也可被消毒剂灭活，如酚、甲 醛、氯和异丙内醇等。 微生物检验 1.发病早期采集腹泻粪便，加9倍量PBS制成10％悬液，3000r／min离心10min，取上清冻存。 2.标本直接电镜和免疫电镜检查 取便抽出 液超速离心，取沉渣经醋酸钠染色电镜观 察，或进行免疫电镜观察，由于病毒颗粒 聚集而易被检出。电镜下常见病毒颗粒， 60-80nm大小，有双层壳，核心呈放射状， 类似车轮排列，此为完整病毒颗粒，空心 的是不完整病毒颗粒。 3.抗原检测 常用ELISA双抗夹心法，用组和亚组特异性 McAb配合使用，可检出A组轮状病毒、并判 定亚组和血清型。约有5％假阳性，系粪便 中类风湿因子所致，此假阳性可用阻断试验 加以克服。以组特异性抗体附着乳胶颗粒， 加粪便抽出液进行凝集反应。具较好的特异 性，但不及ELlSA法敏感 。 3.病毒RNA的PAGE分析 从10％粪便悬液中粗提病毒RNA，经PAGE 电泳，泳动后经硝酸银染色进行分析，根 据A、B、C三组RV 11个基因片段电泳位 置的特殊分布图形进行判断。第一组包括 1-4片段，第二组为5-6片段，第三组为7-9 片段，第四组为10—11片段。根据A组RV的 第10、11片断在PAGE上的迁移率不同分为 两型，即长型和短型。 4．检测核酸 ①核酸杂交，用地高辛等标记组特异性探 针(VP6基因)或型特异性探针 (VP4或 VP7基因型特异性序列)检测轮状病毒RNA； ②PCR技术既可用于诊断，又可用于分型。 由于扩增RV的RNA基因片段，首先需将特 异片段逆转录成cDNA，但粪便中存在抑 制逆转录物质，使该法灵敏度受到一 定影响。 5.病毒分离培养 用原代猴肾细胞和传代非洲绿猴肾(MAl04)，分离病毒的粪便标本，胰酶预处理(10μg／ml),并在培养液中也加入胰酶(0.5～1.0μg／ml)，有利于病毒的生长。37℃旋转培养。经过几代培养后可出现CPE。 第二节 其他胃肠炎病毒 —、肠道腺病毒 人腺病毒D组39型，F组40、41三型能 引起胃肠炎，称肠道腺病毒。住院病 人约占15％，婴儿病毒性腹泻中仅次 于轮状病毒，占第二位。 EAdV为无包膜DNA病毒，其形态结构、 基因组成、复制特点、致病性与免疫 性等与腺病毒，经粪-口传播，主要 发生在夏季，但四季均可发病。 微生物检测 难于生长在组织培养中，40型和41型人对 胚肾细胞系293细胞敏感，用电镜观察和 EIA法检测，也可用PCR法检测，根据六邻 体基因内高度保守序列设计引物，扩增产 物经PAGE电泳染色或核酸探针杂交检测病 毒特异DNA片段。 二、杯状病毒 人类杯状病毒是通过粪-口途径传播，由 污染的水源、食品传播。感染引起小肠绒 毛轻度萎缩和粘膜上皮破坏。突然发病发 热、恶心呕吐、腹痛腹泻，预后良好。约 半数病人粪便中可检测出病毒。Norwalk病 毒是世界上引起非细菌性胃肠炎暴发流行 最重要的病原体，流行于冬季，可累及任 何年龄组，成人抗体阳性率可达55～90％。 人肠道杯状病毒为球形， Norwalk样病毒 表面凹痕参差不齐，为单链RNA，立体对称， 无包膜。只有一种衣壳蛋白，尚不能在细胞 培养中复制，也无敏感动物模型。实验室诊 断主要通过电镜和免疫电镜技术检测病人粪 便中的病毒颗粒，但检测敏感度较低，仅 30％—50％病人粪便中可能检出病毒。近年 来应用基因重组的Norwalk病毒衣壳抗原建 立的ELISA法，可检测病人抗体。 三、星状病毒 1.星状病毒包括人、哺乳动物和鸟星状病毒。 2.可引起胃肠炎，发病率只占病毒性腹泻 的2．8％。通过粪-口途径传播，易感者 是5岁以下婴幼儿，为幼儿园和儿科病房 等医院内感染的主要病原体。 3.发病突起，发热恶心腹泻,持续2～3 天，但免疫功能低下的感染者病程延长。 5岁以下儿童的抗体阳性率在70％以上。 抗体具保护作用。 病毒大小类似于小RNA病毒，呈球形， 直径28～30nm，电镜下可见病毒颗粒 表面有5～6个角，呈有鉴别意义的 星状外形。单正链RNA，临床上至少 具有7种血清型。病毒难于在体外培 养，在有胰酶条件下，某些培养细胞 (如大肠癌细胞)可用于分离星状病 毒，并产生CPE。 微生物检测 在胃肠炎急性期，星状病毒可在粪便中 大量出现，可用免疫电镜直接