二章离心分离.pptVIP

第二章 离心分离 借助离心机旋转所产生的离心力，使不同大小和不同密度的物质分离的技术 细胞的收集、细胞碎片和沉淀的分离等常用离心分离 超速离心技术已成为分离、纯化、鉴别和各种生物大分子的重要手段之一 一 离心机的种类与用途 转速分：常速（低速）、高速和超速 1 常速离心机 8000r/min, R.C.F1*104g 用途：分离细胞、细胞碎片、培养基残渣及粗结晶等较大颗粒 2高速离心机 1*104g～2.5*104 r/min ，R.C.F 1*104g～105g 用途：分离各种沉淀物、细胞碎片及较大的细胞器等 高速冷冻离心机 3 超速离心机 2.5*104g～8*104 r/min ，R.C.F 5*105g或更高 结构：离心管帽、冷冻装置和温控系统、真空系统、安全保护系统、制动系统、指示仪表等。 按用途分： 制备用超速离心机：分离纯化生物大分子、细胞器和病毒等 分析用超速离心机：测定样品纯度（根据紫外吸收率或折光率等判断）、沉降系数、相对分子量 沉降系数S：单位离心力作用下粒子的沉降速度，以Svedberg表示，简称S。1S=1*10-13s 二 离心方法的选择 对于常速和高速离心机，由于所分离的颗粒大小和密度相差较大，只要选择好离心速度和时间，就能达到分离效果。 超速离心的离心方法：差速离心、密度梯度离心和等密度梯度离心 1 差速离心 采用不同的离心速度和离心时间，使沉降速度不同的颗粒分批分离的方法。主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。 2 密度梯度离心 样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的物质得以分离的一种区带分离方法。 密度梯度系统：梯度介质有足够大的溶解度，不与分离组分反应，不会引起分离组分的凝集、变性或失活。 常用介质：蔗糖、甘油等。 样品铺在密度梯度溶液表面，离心后形成若干条界面清楚的不连续区带。 3 等密度离心 当欲分离的不同颗粒的密度范围在离心介质的密度梯度范围内时，不同浮力密度的物质颗粒在离心力作用下一直移动到与各自浮力密度相等的位置（等密度点），形成区带。 等密度离心常用的介质：铯盐，如CsCl，Cs2SO4，CsBr 三 离心条件的确定 离心力（转速） 离心时间 温度 pH值 思考题 1 名词解释 离心分离 相对离心力 沉降系数 2 按离心机转速分，离心机有哪些种类？各自的适用范围是什么？ 3 超速离心方法有哪些？ 4 离心操作应注意控制哪些条件？离心转速和沉降时间有何关系？ * * 沉降系数S与分子量M有对应关系，测出离心机转速、离心时间和粒子移动距离，可求出S，再得到M