白細胞分类计数参考方法.doc

目 次 4 总则………………………………………………………………………………4 方法…………………………………………………………………………………………4 3.1 样本采集…………………………………………………………………………4 3.2 血涂片制备和要求…………………………………………………………………………4 3.3 血涂片染色…………………………………………………………………………………4 3.4 需分类的外周血有核细胞…………………………………………………………………5 3.5 血涂片检查步骤……………………………………………………………………………5 3.6 检验人员要求和考核………………………………………………………………………6 附录A（）常见外周血白细胞形态学………………………………7 附录B（）计算公式…………………………………………………9 附录C（附录）自动白细胞分类计数的性能评价…………………………10 参考文献……………………………………………………16 前 言 为了保证白细胞分类计数结果具有溯源性和准确性，特制定本标准。本标准修改采用了美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁发的《白细胞分类计数参考方法和仪器评价方法》标准（H20-A）。 本标准从20XX年XX月XX日起实施。 本标准的附录A、附录B和附录C都是规范性附录。 本标准由卫生部医政司提出。 本标准由上海市临床检验中心负责起草。 本标准主要起草人：胡晓波、许蕾、宋颖、方心驰、张锦锋。 本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。 白细胞分类计数参考方法 范围 本标准规定了建立白细胞分类计数参考方法中有关样本采集、血涂片制备的要求、血涂片染色、血涂片有核细胞检查的步骤、对检验人员的要求和考核等内容。 本标准适用于建立白细胞分类计数参考方法的实验室 总则 本标准采用手工目视显微镜计数法作为白细胞分类计数的参考方法。 为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室必须进行比对。 方法 样本采集 将静脉血采集于EDTA－K2抗凝剂（液体或粉末状）中（浓度为每毫升血液含1.5～2.2mg EDTA－K2·H2O）。采血后立即混匀，应拒绝分析有肉眼可见凝块的样本。 血涂片制备和要求 血涂片制备 每份样本制作3张血涂片。要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25 mm×75mm，厚度为0.8～1.2mm。并有明确标记。如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。 使用EDTA－K2抗凝血液样本时，应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前，样本应充分混匀。注意，样本不能冷藏。 用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，以30o～45o角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的另一端（见图1）。 3.2.1.4 在1小时内，用Romanowsky类型染液染色；或在1小时内，用无水甲醇（含水量﹤3%）固定后染色。 良好血涂片的要求 血膜至少长25mm，至玻片两侧边缘的距离至少为5mm。 血膜边缘要比玻片边缘窄，且边缘光滑，适用于油镜检查。 血细胞从厚区到薄区逐步均匀分布，末端呈方形或羽毛状。 血膜末端无粒状、划线或裂隙。所有这些情况会使白细胞集中在这些区域内。 在镜检区域内，白细胞形态应无人为异常改变。通常，随着保存时间的延长，抗凝血会造成白细胞形态的改变，如胞浆内形成空泡，核分解破裂等。应将抗凝血液保存时间的影响减小到最低限度。除部分淋巴细胞增生性疾病外，镜检区域内破损白细胞量应2％。 无人为污染。 血涂片染色 采用Romanowsky类染料染色。Romanowsky类染料由亚甲蓝和/或亚甲蓝氧化产物（天青B），和卤化荧光素（通常为伊红B或Y）组成。良好的染色能准确鉴别成熟和未成熟白细胞或异常细胞。 染料的性能 Romanowsky类染料的质量直接影响染色效果。在pH6.4～7.0条件下，染料与细胞中特定成分（细胞核和细胞浆特殊颗粒）相互作用，产生典型的颜色，如细胞核染深紫色，红细胞染鲜亮的橙红色。 可接受的染色情况 粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和其他细胞必须能显示清晰的核浆分界，能识别核染色质成分和细胞浆的颜色差异。 需分类的外周血有核细胞 外周血可见多种有核细胞。常见的有：中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。外周血中正常白细胞的形态描述见附录A。 外周血中少见的其他有核细胞在专业的血液学教科书和图谱中均有描述，本标准中不再叙述。 血涂片检查步骤 血涂片显微镜检查 首先在低倍镜下（10倍～40倍）进行浏览，观察有无异常细胞和细胞分布情况。然后，