植物单宁的含量测定方法.docx

植物单宁的含量测定方法1 植物单宁单宁（Tannins）又称单宁酸、鞣质、鞣酸。按 Bategnt 的定义，指相对分子质量为 500~3000 的能沉淀蛋白质、生物碱的水溶性多酚化合物。主要应用于[1]医药、食品、制革、日用化学品、水处理等领域。单宁在传统医药上内服可治胃肠道出血和止痢，外用于局部止血和创面保护防止感染发炎；近年研究发现单宁还具有抑菌抗病毒、抗过敏、抗氧化和延缓衰老、预防心血管疾病、抗肿瘤和促进免疫等作用。单宁在食品行业中可作为功能性成分用于制作保健品，生产食品添加剂、风味剂等；在化妆品中主要起收敛、防晒、美白、抗皱、保湿、防腐等作用；在制革工业中，单宁是栲胶的主要成分。2 单宁的含量测定经典的有皮粉法、干酪素法、氧化滴定法、分光光度法等；现阶段涌现出许多新型的测定方法，如高效液相色谱法、流动注射分析法、原子分光光度法等。2.1 经典测定方法2.1.1 皮粉法 皮粉法是国际上公认的单宁含量测定方法，从 20 世纪 60 年代至今，原苏联、日本、印度和中国都采用此法作为国家标准测试方法。皮粉的主要成分是蛋白质，单宁是多元酚类，分子中的酚羟基与蛋白质的酰胺键以氢键结合形成不溶于水的沉淀，以此使单宁沉淀下来，用重量法测定其含量。根据皮粉与单宁溶液接触方式不同，可将其分为震荡法和过滤法。震荡法是皮粉与单宁溶液一起震荡来脱去溶液中的单宁；过滤法是将单宁溶液流过皮粉柱层以脱去单宁。通常，过滤法所测的单宁含量比震荡法高 5%～7%。皮粉法所测的是单宁的绝对含量，并且不需要标样，操作简单，可用其测定中药水提液中鞣质的含量[2]。但皮粉法的缺点是，用重量法测定样品时，须经过过滤、干燥、称重，样品耗用量大，测定时间较长，一般样品分析需 20 h 左右，不适合大批量样品的快速测定；没有选择性，对低相对分子质量的多酚也具有一定的吸附能力，往往使测定结果偏高；适用于单宁含量高的样品，不适合低含量和微量测定；另外皮粉试剂的供应和质量都较难保证。针对以上缺点，现在大多采用皮粉 - 分光光度法 [3]、磷钼钨酸 - 皮粉比色法[4]等，具有操作简单、快速、精密度高的优点。2.1.2 干酪素法干酪素的主要成分是酪蛋白，为含磷蛋白。利用其能选择性地结合具有生理活性的鞣质，从而测定具有疗效鞣质的含量。干酪素法一般与分光光度法结合，鞣质在一定的 pH 条件下与Folin 试剂反应，并且鞣质含量与吸光度成正比。很多人利用干酪素法测定了金樱子、侧伯叶、大黄、旋覆花[5- 8]等药材中单宁的含量，此法样品取量少、简单、灵敏、快速、准确，可作为检测植物药材质量标准的可靠分析手段。2.1.3 胶体滴定法胶体滴定法，又称聚电解质滴定法，是利用一些电荷密度已知且性能比较稳定的阴、阳离子聚电解质作为标准溶液，对被测试样进行电荷测量的一种滴定方法[9]。1948 年日本学者寺山宏提出后，经众多研究者的不断改进，已成为最简单的定量分析聚电解质的方法[10- 11]，并且在制革、水处理、造纸、食品等行业得到了广泛的应用[12- 13]。单宁溶液在一定的条件下呈胶体状态，胶粒带负电荷[14]。胶体滴定的具体做法是[15]，于浸提的栲胶溶液中加入过量的 PD（聚二甲基二烯丙基氯化铵） 标准溶液，以 TB（甲苯胺兰指示剂）为指示剂，用 PVSK （聚乙烯醇硫酸钾）滴定过剩的 PD。TB 指示剂带有正电荷，与 PD 不反应，最初呈现蓝绿色。随着滴定的进行，过剩的 PD 会与 PVSK 形成聚离子复合物，此时再滴入的 PVSK 与指示剂反应，产生异染现象，试样溶液立即变为红紫色，指示滴定到达终点。庞燕等[16]利用胶体滴定法测定木麻黄树皮中的单宁，得出了在 pH 为 7 时木麻黄溶液的胶体滴定值与所含单宁含量的线性关系，相关性良好，可以据此来计算未知浓度的木麻黄提取液中单宁的含量。戴丽君等[17]以胶体滴定法和皮粉法分别测定了橡碗栲胶中单宁含量，两者对比发现，胶体滴定法测得的单宁含量值均小于皮粉法的测定值，但是差值不大，究其原因，可能是由于滴定终点的判断、温差等原因引起的。2.1.4 络合滴定法络合滴定法是以络合反应为基础的容量分析方法，又称螯合滴定法。单宁分子中含有多个酚羟基可以与一个中心离子，如铜、锌、铋、铁、汞等进行络合，形成多核络合物，在一定的 pH 条件下沉淀，再通过 EDTA 反滴定过量金属离子来确定单宁的含量。络合法所使用的指示剂一般为金属指示剂，指示终点到达时要求具有较深的颜色，如铬黑 T。利用 Zn2+ 只与单宁反应的特性来沉淀分析溶液中的塔拉单宁，以铬黑 T 作指示剂，用EDTA 溶液滴定剩余的 Zn2+，结果显示塔拉中单宁的质量百分含量为 57.3%，比皮粉法测定的结果要精确[18]。刘佳铭[19]用 Pb2+与单宁络合，以 K2CrO4 为指示剂，PAM（阳