CA199作业返指导书2.0.doc

癌肿抗原199检测作业指导书 1.检验目的： CA19-9测定值由采用的相应单克隆抗体1116-NS-19-9决定。与1116-NS-19-9反应的决定簇存在于分子量为10kD的糖脂抗原上。此种粘蛋白属于一种Lewisa血型决定簇的半抗原。许多粘膜细胞含有这种成分。 有3-7%的人群呈现Lewisa阴性/b阴性血型结构，不表达含CA19-9决定簇的粘蛋白。这一点必须在解释检测结果时考虑进去。这种粘蛋白出现在胎儿的胃、肠和胰腺上皮组织中。成人组织如肝、肺和胰腺也可含有低浓度的该种粘蛋白。 CA19-9测定有助于胰腺癌（敏感性70－87％）的鉴别诊断和病情监测：测定值高低与肿瘤大小无关，但是血清CA19-9水平高于10000U/ml时，几乎均存在外周转移。CA19-9测定不能用于胰腺癌的早期发现。 对于肝胆管癌，CA19-9测定值提供50－75％诊断敏感性。对于胃癌，建议做CA72-4和CEA联合检测。对于结、直肠癌，只做CEA检测已足够，少数CEA阴性病例，CA19-9检测能起作用。 由于粘蛋白主要从肝脏清除，某些患者轻微的胆汁郁积便可导致血清CA19-9水平明显升高。CA19-9升高也见于胃肠道和肝的多种良性和炎症病变，以及Cystic fibrosis。 2.检验原理: 采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：10μl标本、生物素化的抗CA19-9单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗CA19-9单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 3.性能参数： 3.1 线性范围：线性检测结果见CA199方法学验证记录。 3.2精密度:批内n=20,批间n=20。 批 内 批 间 均值U/ml SD U/ml CV% 均值U/ml SD U/ml CV% 6.359 0.1237 1.95 23.77 0.533 2.24 3.3准确度: 检测结果见临检中心/江苏省室间质评结果回报记录。 3.4 可报告范围:0.600-10000 U/ml，最大稀释倍数为10倍。 3.5 测量区间：血清/血浆: 0.600─1000 U/ml。 对高浓度样品可以用重做功能予以确定，或用罗氏通用稀释液手工直接稀释后或在机稀释后测定。 3.6 灵敏度：0.600U/ml 3.7特异性：无 4. 样本要求 4.1血清：按标准常规方法采集。 4.2血浆：肝素、EDTA-K3、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。 4.3标本在2－8度可稳定2天，-20度可稳定6个月。只能冻融一次。 4.4含沉淀的标本使用前需离心。 4.5标本和质控品禁用叠氮钠防腐。 5.试剂和设备： 5.1 设备：COBAS6000组合模块E601 （1）检查供水系统是否正常。 （2）检查试剂盖是否松开。 （3）接通仪器左侧上方电源按钮,仪器自检。 （4）登录：输入用户名及密码，仪器初始化，进行自动维护，然后进入Stand by状态。 5.2 试剂厂商：罗氏诊断产品公司 5.3试剂及使用前准备 （1）试剂成分： M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1：生物素化的抗CA19-9单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度3mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.5。含防腐剂。 R2：Ru(bpy)3 2+标记的抗CA19-9单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml，浓度4mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.5。含防腐剂。 （2）试剂准备： 检查各种试剂所需使用的试剂量 （3）试剂贮藏要求： 存放在2－8度，切莫倒置。 未开封，可稳定至标明的保质期。 开封后，2－8度12周； 放在COBAS6000上，8周； 注意：仅供体外诊断使用；避免皮肤直接接触液体试剂；废弃物按生物危害垃圾处理。 6.校准程序： 6.1校准品：罗氏COBAS6000原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。 复溶：用复溶专用加样枪准确吸取1mL去离子水于瓶中，溶解静置1小时，混匀并用有盖小子弹头分装200μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。 复溶后校准品成分的稳定性：2-8℃储存。稳定性：未打开，2-8℃有效期内均可打开后，2-8℃下： 1