实验七、革蓝氏染色法.ppt

Exp. 4 Gram Stain Aim Learn and practice Gram’s stain Learn the principle of Gram’s stain Know its importance in Bacteria taxonomy Introduction of Gram stain Development of Gram stain the principle of Gram stain Importance of Gram stain for Microbiology Material 菌种: 参考菌：G+：Staphylococcus aureus, G-: Escherichia coli 待测菌：Bacillus thuringiensis, Bacillus cereus 仪器 显微镜； 材料 载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。 染料 草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液； Methods 涂片 初染 媒染 脱色 复染 镜检 Development of Gram stain Gram stain was developed by C．Gram a Denmark pathologist in1884. Bacteria can be divided into two group: one is Gram positive bacteria, the other is Gram negative bacteria. 革蓝氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较 成分 占细胞壁干重的% 革蓝氏阳性菌 革蓝氏阴性菌 肽聚糖 含量很高（50-90） 含量很低（~10） 磷壁酸 含量较高（50） 无 类脂质 一般无（ 2） 含量较高（~20） 蛋白质 无 含量较高 Principle G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。 G?菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 革蓝氏染色的意义 细菌分类鉴定 指导临床用药 微生物分类鉴定的特征 形态学和生理生化特征 血清学实验和噬菌体分型 氨基酸序列和蛋白质分析 核酸碱基组成和序列分析 形态学特征 培养特征、菌落的形状、大小、颜色、表面特征、光泽等 细胞形态：形状、大小、排列方式 特殊结构：鞭毛、芽孢、孢子、荚膜等 细胞内涵物 染色反应：革蓝氏染色、抗酸性染色 运动性 涂片 要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色; 注意练习无菌操作； 在载玻片上滴半滴生理盐水； 取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可； 菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。 ⑴初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。 ⑵媒染 滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。 ⑶脱色 滴加95%乙醇，脱色20-25s立即水洗，以终止脱色。 ⑷复染 滴加蕃红，染色2-3min，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。 干燥后，置油镜观察。被染成紫色者即为革兰氏阳性菌(G?)；被染成红色者是革兰氏阴性菌(G-)。 生命科学学院微生物学教研室－YJH 微生物学实验 生命科学学院微生物学教研室－YJH 微生物学实验