定点突变技术讲述.ppt

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* 根据我们所学的知识,你有几种方法把两个DNA片段定向连接起来? 先用同种限制性核酸内切酶切,使两段DNA片段中需要连接的一端形成相同的黏性末端; 然后再用相应的DNA连接酶将两个黏性末端连接起来。 直接用DNA连接酶将两个片段连起来。 合适酶切位点及相应的DNA限制酶比较难找 连接时没有方向性。 PCR后的产物中包括目的基因和引物尾部的碱基对 先让我们回顾一下PCR的原理(简化) DNA1 DNA2 a b c d a b c d a 5’ 3’ 3’ 5’ 3’5’ 5’3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ PCR PCR 升温 退火 d 5’ 3’ 3’ 5’ 定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。 延伸 添加 删除 点突变 Thinking…… 其实,不管是碱基对的添加、删除还是点突变,我们都可以将需要突变的部位当成是断开的就行了。 添加:将基因中需要添加碱基对的部位看成断开,在引物中加入需要添加的碱基即可 删除:将基因中需要删除的碱基对看成没有即可 点突变:综合添加和删除,即将基因中需要突变的基因看成没有,将需要的碱基对加入引物中 A T 给一段DNA: 要求:把其中的A-T碱基对定点突变成为G-C碱基对 首先: 先“去除”A-T碱基,得到两段DNA *

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