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S009Rh阴性确认试验操作标准化规程
文件名 RhD阴性确认试验标准化操作规程 编制人 审核人 批准人 批准日期 修改日期 签 字 修改日期 签 字 复审日期 签 字 复审日期 签 字
RhD阴性确认试验标准化操作规程
一、目的
为保证血液及血液成分的红细胞RhD血型在临床上同型输注,确保临床输血安全,对红细胞RhD阴性确认。
二、方法
采用间接抗人球蛋白法;
三、原理
根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理,用不同批号的IgG性质抗D血清与被检红细胞在抗球蛋白介质中反应,若出现凝集现象,表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的D抗原,从而判断被检者的Rh血型。
四、适用范围
适用于输血前患者与献血者常规RhD抗原定型为阴性的标本作确认。
五、仪器设备
普通离心机; 37℃恒温水浴箱;
六、试剂
1、试剂名称:RhD(IgG)血型定型试剂盒(单克隆抗体)
2、试剂生产厂家:北京金豪制药股份有限公司;
3、批准文号:国药准字
4、包装规格:1支/盒,10ml/支;
5、贮藏条件;2-8℃避光保存。
6、有效期:自检定合格之日起12个月;
七、检测样本要求
1、标本类型:静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集:见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输:新鲜血2~8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态:标识不准确、标本稀释、细菌污染,严重溶血等不能测定。
八、操作步骤
1、将待检标本用生理盐水洗三次,最后一次900g离心1分钟,用生理盐水制成2~4%红细胞悬液。2、取小试管3支,并标记,分别加入三种不同批号的RhD(IgG)血型定型试剂50微升于小试管内。3、再分别加入50微升待检标本的2~4%红细胞生理盐水悬液于上述小试管内,混匀,37℃孵育30~60分钟。4、分别用生理盐水洗涤红细胞三次,最后一次900g离心1分钟,弃上清,留红细胞沉淀。
5、再分别加入100微升抗人球蛋白试剂于上述小试管中,混匀;
6、900g离心15秒,立即观察结果。
7、结果判定:
红细胞凝集为RhD抗原阳性,不凝集为RhD抗原阴性。
九、质量控制
1、对新进批号的试剂应作抗体效价验定。
2、此检测项目应参加卫生部临床检验中心组织的室间质评,且成绩合格;
3、每次做血型鉴定应采用RhD抗原阳性和阴性的对照红细胞做室内质量控制,且要求在控。
4、严格执行查对制度,判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误等引起的差错。
5、检测标本应在2~8℃保存留一周,以备复查。
6、抗球蛋白法结果有疑问时应进一步用吸收放散试验做确认,必要时以基因分型技术协助鉴定。
十、生物参考区间
RhD血型:阳性,阴性、弱D。
十一、注意事项
1、检测标本必须正确有标识,其血液量、红细胞或血浆的质量符合实验要求和受血者当前免疫学状态;
2、输血前检查要求是输血前3天内的血样(预防受血者在输血前的3个月之内可能有妊娠或输血等免疫史而可能产生不规则抗体)。
3、标本血液离体后要求尽快送检,至检测完毕最长不能超过3d,每次检测后受血者和供血者的血标本应在2℃~8℃保存7天;
4、每批次试剂均应进行效价测定,试剂使用前应仔细检查试剂的贮存条件是否符合要求、是否变质失效;
5、注意红细胞洗涤、离心力、温度、红细胞浓度及抗原抗体的比例对试验结果的影响;
6、患者使用的药物影响的处理:如果使用右旋糖酐、PVP等治疗,应注意将红细胞洗涤;如果受者使用肝素治疗,则应用硫酸鱼精蛋白对抗,使样本凝结结;
十二、参考文献
1、胡丽华主编,临床输血检验,第1版。中国医药科技出版社,2004;
2、叶应妩,等主编,全国临床检验操作规程,第3版。东南大学出版社,2006,11;
3、RhD(IgG)血型定型试剂盒(单克隆抗体)说明书。
标准化操作规程 作业指导书 SOPREG009.01
赣州市人民医院输血科 第 5 页 共 5 页
SOPREG009.01 第 5 页 共 5 页
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