抗生素微生物检定法(实习总结).doc

抗生素微生物检定学习报告及总结 抗生素微生物检定法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。 管碟法（二剂量）测定抗生素的效价 （内径6.0±0.lmm，外径8.0±0.lmm，高10±0.lmm）20ml加入到无菌平皿内，凝固后作为底层培养基。 B1：标准品低浓度溶液 T1：供试品低浓度溶液 B2：标准品中浓度溶液 T2：供试品中浓度溶液 B3：标准品高浓度溶液 T3：供试品高浓度溶液 点样结束后，盖上陶瓦盖，将碟子平稳放置于35～37℃恒温培养箱内培养15～18小时即可取出测量。 于多功能微生物自动测量分析仪上测量抑菌圈大小，并出结果，记录。 二剂量法计算公式： 三剂量法计算公式： P为供试品效价（相当于标示量或估计效价的百分数） S1为供试品低浓度溶液所致抑菌圈直径（或面积）的总和 S2为标准品中浓度溶液所致抑菌圈直径（或面积）的总和 S3为标准品高浓度溶液所致抑菌圈直径（或面积）的总和 T1为供试品低浓度溶液所致抑菌圈直径（或面积）的总和 T2为供试品中浓度溶液所致抑菌圈直径（或面积）的总和 T3为供试品高浓度溶液所致抑菌圈直径（或面积）的总和 I为高低浓度剂量之比的对数值 3 结果判断 3.1 可靠性测验 管碟法系根据量反应平行线原理儿设计，并要求在实验所用的剂量（浓度）范围内，对数剂量与反应呈直线关系。可靠性测验即通过对剂间变异的分析，一测验标准品和供试品的对数剂量与反应的关系是否显著偏离平行直线。用抑菌圈测量仪测量抑菌圈是，测量与统计学处理一次完成，统计学分析按药典附录的生物机电统计法进行F的显著性测验。要求直线回归和剂间要非常显著（P0.01），偏离平行应不显著（P0.05），二次曲线和反向二次曲线均应不显著（P0.05），符合以上规定，才能认为实验结果可靠，方可进行效价和可信限率计算。 3.2 可信限率考核实验的精密度，除药典各论另有规定外，管碟法的可信限率不的超过5%。 上述各项都能符合，试验结果成立。 3.3 试验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的110%，则检验结果仅作为初试，应调整供试品效价，予以重试。 纯化水微生物限度检定实验（薄膜过滤法） 采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大一0.45μm，选择滤膜材质是应保证供试品机器溶剂不影响微生物的充分节流。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性公式也过滤前现将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。 1 实验材料 1.1 实验样品 取自各个采样点的纯化水 1.2 实验试剂 pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、营养琼脂培养基均按照说明配制后经115℃，30分钟高压蒸汽灭菌后备用。pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液灭菌前即分装100ml三角烧瓶内，每瓶装90ml。 1.3 实验用具 0.45μm孔径滤膜（用多少取多少）、过滤器、镊子及所有用具均采用湿热灭菌方式121℃，15分钟进行灭菌，并保证滤膜在使用前后的完整性。 1.3 培养皿的制备 进入微生物限度检定室以75%酒精或者0.2%新洁尔灭溶液擦拭清洁后，开紫外照射灭菌30分钟，使用时提前10分钟关掉紫外，开风机吹一会。配制并灭菌好的培养基及其它用具一律经传递仓传递入无菌室内。 于无菌操作台上向培养皿内加入20ml左右的培养基，水平放置待冷却凝固后用于实验。 2 实验过程 以下实验操作均在严格的无菌环境进行，所以进入后要着无菌服，并用酒精棉球严格擦拭手部。 安装过滤器，装上滤膜，取少量pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液湿润滤膜。 打开预先准备的盛有90ml pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的烧瓶，取10ml样品纯化水，，振摇混匀后取10ml过滤膜，真空泵抽滤过滤，再以100ml pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗一次。 用无菌镊子轻轻取下滤膜菌面朝上贴于准备好的培养基上。每个样品做一个培养皿。 以pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液过滤膜作为阴性对照。 同时设立阳性生长菌对照。金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、黑曲霉菌、短小芽孢杆菌、大肠杆菌。 平皿放置在30～35℃生化培养箱内培养3