工程菌的高效表达与稳定性.pptVIP

提高质粒稳定性的方法 1.选择合适宿主菌 宿主菌的比生长速率、基因重组系统的特性、染色体上是否有与质粒和外源基因同源序列等都会影响质粒的稳定性。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2.选择合适的载体 改造、构建能稳定表达的质粒载体是构建工程菌的重要一环。针对不同的载体及不同的目的采取不同的策略。 3.选择压力 从遗传学来说，选择意味着利用某些生长条件使得只有那些具有一定遗传特性的细胞才能够生长。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 工程菌的高效表达和稳定性 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 工程菌简介 用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系一般称为“工程菌”。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 工程菌的高效表达 基因工程的最终目的是在一个合适的系统中， 使外源基因高效表达，从而生产有价值的蛋白 质产品。表达系统有原核系统和真核系统。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 原核生物基因表达的特点：（1）???原核生物只有一种RNA聚合酶，识别原核的启动子，催化所有RNA合成。（2）???原核生物的基因表达是以操纵子为单位。操纵子是数个相关的结构基因及其调控区的结合，是一个基因表达的协同单位。（3）???由于原核生物无核膜，所以转录与翻译是耦联的，二者也是连续进行的。原核生物染色体DNA是裸露的环型DNA，转录成mRNA后，可直接在胞浆中与核糖体结合翻译成蛋白质。每个核糖体可独立完成一条链的合成，多核糖体可同时在1条mRNA合成多条肽链，大大提高了翻译效率。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （4）???原核基因不含内含子（intron），没有转录后加工过程。 （5）???原核生物基因表达的控制主要是在转录水平。对RNA合成的调控有两种方式：启始控制（启动子控制）和终止控制（衰减子控制）。 （6）???在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，有一个转译启始密码子及同16S核糖体RNA3‘末端碱基互补的序列，即SD序列，真核基因则无此序列。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 外源基因在原核中表达的关键： （1）???通过表达载体将外源基因导入宿主菌，并指导宿主菌的酶系统合成外源蛋白； （2）???外源基因不能带有intron； （3）???利用原核细胞的强启动子和SD序列等控制外源基因的表达； （4）???外援基因与表达载体连接后，必须形成正确的开放阅读框架； （5）???利用宿主菌的调控系统，调节外源基因的表达，防止表达的外源基因产物对宿主菌的毒害。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 外源基因在真核细胞中的表达 哺乳动物细胞做宿主表达体系的优点： （1）?能识别和除去外源基因中的内含子，剪 切加工成成熟的mRNA； （2）?表达的蛋白质在翻译后被加工的机会多 （如糖基化），更接近于体内构型； （3）?易被重组DNA转