平板划线试验讲述.ppt

平板划线实验 一、培养基 培养基按其物理性状，分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。 培养基按用途，分基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。 二、细菌的接种方法 将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。 当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分为四种。 常见的几种细菌的培养和基接种方法举例 平板划线接种法 斜面培养基 接种法 液体培养基 接种法 穿刺接种法 菌种 葡萄球菌和大肠杆菌的混合菌液 大肠杆菌培养物 大肠杆菌培养物枯草杆菌培养物 变形杆菌培养物痢疾杆菌培养物 培养基 普通琼脂平板 琼脂斜面 培养基 普通肉汤 培养基 半固体琼脂 培养基 三、平板划线接种法 常用于分离单个菌落，也可用于观察细菌的生长状况和观察某些生化反应。 （2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。 （1）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接种者姓名、日期等。 （3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来的位置。 （4）分离划线接种细菌（四区接种法） ①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5），此视为二区。 ③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4），此为三区。 ④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。 平板划线接种法 四区划线 （5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放，放进37℃温箱培养。 （6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。