连接酶链反应在人Amelogenin基因座检验中的初步研究.pdf

型皇堇丕 生筮 塑 ·技 术 交 流 · 连接酶链反应在人 Amelogenin基因座检验中的初步研究 宫荣彬 ，刘康武 ，缪 明。，徐 伟。，周 炜 (1．安徽省公安厅物证鉴定管理处，合肥 230061；2．安徽省淮北市公安 局，235000；3．安徽省淮南市公安局 ，232000；4．安徽省铜陵市公安局，244000) 摘要： 目的 建立连接酶链反应(Ligase Chain Reaction，LCR)应用于法医学领域的初步方法探索。方法 选 择人 Amelogenin基 因座进行连接酶链反应。针 对人 染色体 Amelogenin基 因座 Xp22．1一．3、Ypl1．2上 M55418、M55419的序列，自行设计特异引物，建立 LCR最佳体 系，对男性和女性 Amelogenin基因座进行分 型。结果 巢式 LCR能够对男性和女性 Amelogenin基因座正确分型。结论 LCR技术能够应用于人 Amelogenin基因座分型，但尚需进一步简化和改进。 关键词： 连接酶链反应；Amelogenin基 因座 中图分类号：DF795．2 文献标识码：A 文章编号：1008—3650(2013)01—0035—03 Ligase chain reaction assay for gender typing test of human Amelogenin locus GONG Rong-bin，UU Kang—wu，MIAO Ming，et a1．(P Security Department of Anhui Province，Hefei 230061， China) ABSTRACT： 0bjective To explore the forensic application of Ligase Chain Reaction(LCR)．Methods The human Amelo— genin locus was selected for LCIL According to the sequences of M55418 on the human Amelogenin chromosome loci Xp22．1—3， and M55419 on Ypl1．2，the primers was designed and the LCR system was set up for genotyping male and female．Results The genotypes of male and female Amelogenin loci can be get by nested LCR correctly．Conclusion LCR can be applied to human Amelogenin 1OCUS genotyping． KEY W ORDS： ligase chain reaction(LCR)；Amelogenin 1OCUS 连接酶链反应(Ligase Chain Reaction， )是继 聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)之后发 展起来的一项具有良好应用前景的DNA扩增技术_1]。 它在热稳定的 A连接酶的作用下，通过连接与模板 DNA互补的两个相邻寡核苷酸链，能够快速进行 A 片段扩增。若相邻两个寡核苷酸接头处与靶核苷酸之 间即使有一个碱基错配，也不能被连接和扩增。 目前，LCR因其应用于 DNA扩增，同时能够区 别单个位点的碱基突变，在 国内外医学领域得以发 展，在诊断遗传性疾病和某些感染性疾病(如病毒或 支原体感染)上取得了很好的效果_2_引，同时为分子生 物学研究提供了新的技术发展方向。I』 能否应用于 法医学领域，本文针对较容易鉴别的人血样 Ameloge— nin基因进行检验，做了初步的研究，报道如下。 1 材 料 1．1 实验样本 (1)未知生物检材：来源于实际案件中的现场检 作者简介：宫荣彬(1974一)，男，安徽淮北人，副主任法医师，理 学学士，主要从事法医物证的检验和研究。 Tel：0551—2801663；E-mail：grbhb@163．com 材 48份，分别采用 Chelex法或有机溶剂法提取 DNA。(2)已知样本：取 6名男性和两名女性的血液 各 20％L，用 Chelex法提取 DNA。(3)对照样本：男 性样本 9948，lng／~L；女性样本 9947A，Ing／#L；阴 性对照：水。 1．2 试 剂 TaqDNA连接酶(纽英伦生物技术北京有限公 司)，TaqDNA聚合酶、dNTP(上海生工)，GENMED 超声化鲑鱼精单链 DNA(sssssDNA，上海杰美基因 医药科技有限公司)