邻氯扁桃酸甲酯的微生物拆分.pdf

邻氯扁桃酸甲酯的微生物拆分??????????????廖洛赵蕊?何帅伟韩静任存邦?畂????????????????甤?????戴桂馥吴健’药理学研究表明存在手性对映体的药物往往只有一种对映体具有所需的药效，而另一种则无药效且有效率高、选择性强、成本低、装置简单．环境污染少等显著优判?，是近年来研究的重点和热点。如国?牧嫌敕椒?具有不希望发生的副作用?ぁ?。因此，全球范围内对单一对映体药物的需求持续增长。扁桃酸系列化合物是重要的药物中间体和精细化工中间体，可用于合成血管扩张药屋环扃酯、眼科药物羟苄唑及中枢神经兴奋药匹莫林等多种扁桃酸系列药物。就目前技术而言，还只能依靠形成非对映体盐法拆分化学合成的外消旋扁桃酸，但手性拆分试剂昂贵成本很高。生物催化由于酶的专一性，在制备手性化合物方面，具外??????热擞眉偎拷湍钢械乃?饷噶⑻逖≡裥运?獗馓宜峒柞ィ琓???热薸?利用链球菌、假丝酵母、肠球菌、红酵母、酵母等中的还原酶将苯乙酮酸立体还原为?一?槐馓宜幔??谌缋钪仪俚热???员揭彝K嵛T?希??媒湍赶赴?械难趸?乖?亚饷福?铣闪薘??一扁桃酸，但对扃桃酸的重要衍生物邻氯扁桃酸的手性合成则鲜有报道。本研究旨在利用自然界种类繁多的微生物资源，筛选适宜的微生物，立体选择性水解邻氯扁桃酸甲酯得到具有单一手性的邻氯扁桃酸，为微生物法拆分消旋邻氯扁桃酸的工业应用提供技术支持。??材料邻氯扃桃酸甲酯?献鞒Ъ姨峁?，其它试剂为国产试剂，分析纯。??实验仪器第五届全国制药工程科技与教育研讨会／生物制药??年?月郑州大学生物工程系郑州河南???·男，副教授，硕士生导师，研究方向为微生物代谢与发酵工程。???：?????．??甤??Ｖ荽笱??锛际踝ㄒ???毂究票弦瞪??治1本├砉ご笱???端妒垦芯可??关键词邻氯扁桃酸甲酯；邻氯扁桃酸；生物转化；毛细管电泳中图分类号?文献标识码?摘要目的：从土壤中筛选出能立体选择性水解邻氯扁桃酸甲酯，获得单一手性邻氯扁桃酸的菌株。方法：土样通过各种培养基初筛到酯酶活力较高的菌株，并通过复筛测提取定菌株水解邻氯扁桃酸甲酯的产物旋光度，从而得到目的菌株。结果与结论：初步筛选到?昃?芩?獾孜锷?蒖??邻氯扁桃酸，但光学纯度尚待进一步研究。?????“????????．????篠??????琖??—?????琀?????，????，??????珼???????????，??????????籵??????????；?????????籧?????玎?????????????．?????????：?狢??????????琤?·??? 富集培养基：邻氯扁桃酸甲酯?甇?／?⒔湍父?．略／???。?????眩疞、???甇?疞、???．嗯／?琾??????毛细管电泳?拦鶰????公司??愦笾谴颪??色谱工作站采样系统；????远??孕?庖?上海浦东威力光学仪器厂?琑????旋转蒸发器?虾Ｑ侨偕??瞧?厂?珺?????????离子阱液相色谱质谱仪?鹿?悸晨斯??。??培养基麦氏培养基葡萄糖???疞、?????疞、酵母抽提物???疞、醋酸钠???疞．?甇?疞、????．?复筛培养基：蛋白胨?．?／?⒔湍赋樘嵛?．?／??????实验方法??．?诼缺馓宜岬亩ㄐ约觳夂投?考觳猓好?腹艿缬炯觳猓??腹苤?露????ぷ鞯缪????进样时间?，缓冲液为???的???鹚嵫位撼逡骸???．??舛炔舛?氨刃?舛扔攵杂程骞?恐??％?募扑悖航ǚ⒔鸵褐械牟?镙腿〉剿?啵??接进行旋光测定，并将其推算成比旋光度。?％??返谋刃?舛龋?抗庋Щ钚缘谋馓宜岜刃?舛萖??．?腿》椒ǎ孩俳ň?豪胄模????，???虎谌∩锨澹?油?寤?芳和榻??嘀辛诼缺?桃酸甲脂提出，连续提三次，将邻氯扁桃酸甲酯的含量降到最少；③取水相，加同体积乙酸乙酯，用浓盐酸调??，抽提邻氯扁桃酸一次；④取有机相，加??体积水，用氨水调??，将邻氯扁桃酸抽提到水相中。??．??甑纳秆×鞒蹋和裂?患拥轿蘧?????／?一振荡一取上清液一稀释后在培养基上涂皿，??一?℃下培养????筛选一挑出菌落复筛?孔板培养??????入体积分数为??％的邻氯扁桃酸甲酯一水解??惶舫鲇兴?饽芰Φ木?杲?幸∑坷┐笈嘌?患觳飧镁?甑乃??产物邻氯扁桃酸的旋光度。?峁?胩致?采用??．?姆椒ǘ愿髦掷丛吹??余种微生物进行了筛选，其中有?多株可以把邻氯扁桃酸甲酯较好的水解，其转化产物用毛细管电泳检测，如图?其中出峰时间?种拥奈5孜锪诼缺馓宜峒柞ィ?．???笥业姆逦W;??眯虏?铩＝ǚ⒔鸵狠?取后结晶，晶体经过质谱分析，确定为邻氯扁桃酸。测定的结果如图??／???琍????疞，???。??ァ???璳???图?;??锏拿?腹艿缬炯觳????????????????????????????癬?嘲‘?琱??鵷．?鋧????????眔·??’‘