(2013-5-8) 酶化学A教学.ppt

思考题 1、如果某1单底物酶促反应是二级反应，E + S→ES→P 那么决定其催化反应速度的常数是：（ ） ????????①Km; ②Ks; ③Kcat; ④Kcat/Km 2、 一个酶有多种底物，判断其底物专一性强弱应依 据参数；（ ？ ） 华南理工大学2009生物化学　（1）Kcat　（2）Km　（3）Kcat/Km （4）其它 3. 判断: 一个酶催化正反应和逆反应的Kcat或Km值可以不同,但Kcat/Km比值通常是相同的 (-) Kcat/Km称为酶的专一性常数,它不受非生产性结合与中间产物积累的影响,可以表示酶对相互竞争的几种底物的专一性 思考题 5. 为验证羧肽酶A Tyr 248 在催化中的作用，对其基因进行定点突变－Tyr 248（TAT）定点突变为Phe（TTT）；实验结论是，Tyr 248 参与了与底物的结合，但不是催化所必须的，此结论必定来自如下数据： A. Kcat 突变后降低 B. Km 变大 C. Kcat/Km 升高 D. Kcat 不变 E. Kcat/Km 降低 上海交通大学2007生物化学 4. 解释酶的km和kcat，讨论二者在酶学研究中的应用？ (Km多条用途-上述） 中国农业大学2011年生物化学 6. 根据以下各酶的kcat（sec-1）和Km（M）值，判断最完善的酶是（1）乙酰胆碱酯酶 kcat＝1.4×104，Km＝9×10-5（2）过氧化氢酶 kcat＝4×107，Km=1.1（3）富马酸酶kcat＝800，Km＝1.8×10-5（4）磷酸丙糖异构酶kcat＝4.3×103，Km＝1.8×10-5（5）β?-内酰胺酶kcat＝2×103，Km=2×10-57. 欲使某酶促反应的速度等于Vmax的80％，此时底物浓度应是此酶Km值的多少倍? （1）2 （2）4 （3）8 （4）10 南京大学2005年 思考题 9. 在判断酶对底物的亲和力时，认为最适的底物应该是： A、Km值最小 B 、Km值最大 C、Vmax/ Km值最小 D、Vmax /Km值最大 10 下列关于Km的陈述，哪个是正确的？ A，Km是酶的特征性常数 B, Km是底物和酶反应的平衡常数 C, Km与酶浓度有关 D, Km与酶和底物的浓度都有关 厦门大学2003生物化学 厦门大学2008生物化学 思考题 8、Km和Vmax值的测定 (1) 以v-[S]作图，可以得到Vmax，再从1/2 Vmax， 可求得相应的[S]，即Km值。 要从实验数据所得到的v-[S]曲线来直接决定Vmax是很困难的，也不易求出Km值 Km和Vmax值的测定(续) （2）、?Lineweaver-Burk? 双倒数作图法 斜率= Km/Vmax 纵坐标上的截距=1/Vmax 横坐标上的截距=- 1/Km 用于测Km值和Vmax值 用于判断可逆性抑制反应的性质 双倒数作图法的用途 Km和Vmax值的测定 Vmax Km S vo 1/S 1 vo Double reciprocal Direct plot 1) Use predefined amount of Enzyme → E 2) Add substrate in various concentrations→ S (x 軸) 3) Measure Product in fixed Time (P/t)→ vo (y 軸) 4) (x, y) plot get hyperbolic curve, estimate→ Vmax 5) When y = 1/2 Vmax calculate x ([S]) → Km 1 Vmax - 1 Km 1/2 Problems with Lineweaver-Burk 1. Vo is normally measured at high [S] because you get faster rates (easier to measure). 2. For small values of [S], small errors in Vo lead to large errors in 1/Vo. 动力学数据最佳在0.5~5Km Km和Vmax值的测定(续) 1 向酶促反应体系中增加酶的浓度时，可出现下列哪 一种效应（ ） A．