3_第五章_菌种的制备和保藏教学.ppt

第五章 菌种的制备和保藏 5.1 微生物的生长、繁殖 5.2 固体孢子的制备 5.3 摇瓶种子的制备 5.4 菌种保藏 第1节 微生物的生长、繁殖 一、概述 生长就是有机体的细胞组分与结构在量方面的增加。 二、细菌的繁殖 1）极性生长 放线菌的繁殖体以极性伸长方式进行生长 通过顶端菌丝的延伸 2）分化 基内菌丝提供营养物质供气生菌丝生长 3）孢子形成 4）分枝 菌丝分枝一般发生在坚硬细胞壁恢复可塑性时 四、霉菌的繁殖方式 1、直接法 2、间接法 六、群体生长规律 第2节 固体孢子制备 固体孢子是生产种子的一种形式。 一般繁殖能力强、孢子数量多的菌种可用固体孢子进罐。 一、不同菌种的固体孢子制备工艺 麸皮是主要原料 其质量对培养基起决定性的作用 采用优质小麦，冲洗后盖湿布使充分均匀的吸水 盖闷2~3 h后晾干水分，磨成片状后过20目筛 晾干备用 二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法 二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法 菌种的遗传基因型；培养条件 二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法 通气量 二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法 二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法 二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法 第3节 摇瓶种子的制备 摇瓶种子： 从斜面种子接种入锥形瓶内的液体营养培养基中，在摇床上振荡培养得到的液体种子。 第4节 菌种保藏 二、菌种保藏的原理 首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等。 三、菌种保藏方法 各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。 低温是保藏菌种的重要因素之一 一般微生物在-30oC时即停止生长 低温处理菌种时要注意对细胞的损伤 因为细胞外的培养基比细胞内物质结冰早 可加保护剂甘油 （一）斜面低温保藏法－－常用保藏法 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全 后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏 期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏， 如此连续不断。 （二）石蜡油封藏法 此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体 石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物） 上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培养物与空气隔绝， 加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内 保藏。 （三）沙土管保藏法 一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的 微生物及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的 细菌及酵母则不适用。 （四）麸皮保藏法 又称曲法保藏。即以麸皮作载体，吸附接入的孢子，然 后在低温干燥条件下保存。其制作方法是，将麸皮与水 以一定的比例拌匀，装量为试管体积2/5，湿热灭菌后经 冷却，接入新鲜培养的菌种，适温培养至孢子长成。将 试管置于盛有氯化钙等干燥剂的干燥器中，于室温下干 燥数日后移入低温下保藏；干燥后也可将试管用火焰熔 封，再保藏，则效果更好。 （五）甘油悬液保藏法 此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温度若采用－20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用－70℃，保藏期可达10年。 （六）冷冻真空干燥保藏法 又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立即熔封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。 （七）液氮超低温保藏法 简称液氮保藏法或液氮法。它是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（－196℃）下保藏的方法。其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。 （八）宿主保藏法 此法适用于专性活细胞寄生微生物（如病毒、立克次氏体等）。 在上述的菌种保藏方法中，以斜面低温保 藏法、石蜡油封藏法、宿主保藏法最为简 便；砂土管保藏法、麸皮保藏法和甘油悬 液保藏法次之；以冷冻真空干燥保藏法和 液氮超低温保藏法最为复杂，但其保藏效 果最好。应用时，可根据实际需要选用。 美国ATCC采用冷冻干燥保藏法和 液氮保藏法来保藏所有菌种。 此法适用于产孢子的霉菌和某些放线菌，保藏 期在1年以上。因操作简单、经济实惠，工厂较 多采用。 将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经121℃蒸汽灭菌20min的甘油混