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新疆北部地区棉铃虫与玉米螟对Cry1Ac的抗性研究 姓名：刘 艳 导师：王佩玲 副教授 专业：农业昆虫与害虫防治学号：2012407023 主要研究内容 主要内容 研究目标及拟解决的关键问题 研究方法及技术路线 本课题的特色与创新 实验进展情况 选题的背景及研究意义 国内外研究现状 国内外研究现状 抗性监测研究方法 剂量反 应法 分子检测法 F1代检测法 诊断剂量法 研究方法 F2代检测法 F2代检测法 F2代检测法 分子检测法 分子检测法 国内外研究现状 转Bt棉主要是通过来源于苏云金杆菌的内毒素Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac的表达控制棉铃虫的种群动态（Huang F，2006）。其中棉铃虫对三种毒素的抗性从高往低的顺序是：Cry1Ac﹥Cry1Ab﹥Cry1Aa。杜文晓等人研究表明随Bt毒蛋白（Cry1Ac）浓度的增加，棉铃虫的死亡率逐渐增加但并不呈直线比例。 王冬梅等人对新疆北部地区转Bt基因棉外源杀虫蛋白表达时空动态研究表明，其中棉花的各个生育期中以子叶期的Bt杀虫蛋白的含量最高。 迄今为止,印度谷螟在室内对Bt产生抗性，小菜蛾、美国棉铃虫、印度红铃虫、蔬菜温室大棚粉纹夜蛾等几种重要农业大田害虫对Bt毒素的抗性已有报道,但棉铃虫对转Bt基因作物的抗性遗传研究尚未报道（Lisa J. Bird，2007）；同时，目前对玉米螟对Cry1Ac的抗性监测尚没有报道。 国内外研究现状 棉 选题的背景及意义 棉花产业对新疆经济及我国纺织业具有不可取代的重要地位，是新疆发展战略的重要支撑。“十一五”期间新疆棉花种植面积达1.7×106 hm2年产量可达2.5×109 kg，约占全国产量的40%和全球的十分之一，是区域经济的支柱产业，对中国的棉花产业安全、新疆区经济发展及其社会稳定有着重要意义。 在新疆棉区，Bt棉的种植面积逐年扩大，已成为防治棉铃虫的重要方式。由此是否会引发棉铃虫的抗性正日益受到人们的广泛关注 玉米螟是为害棉花较为严重的一类害虫，在转基因玉米还没引入新疆之前，研究玉米螟对Bt毒蛋白（Cry1Ac）的敏感基线对转基因玉米在我国的发展具有重要意义 选题的背景及意义 棉铃虫幼虫 玉米螟幼虫 作为抗性治理的重要组成部分，只有通过抗性监测才能了解害虫群体的抗性水平或抗性基因频率，进而采取相关措施。因此，加强研究棉铃虫对Bt棉抗性现状，提出合理有效的抗性治理措施势在必行。 本实验通过室内生物测定方法评估了当前新疆北部植棉区棉铃虫和玉米螟对Bt毒蛋白的敏感性和抗性，为探索适合干旱地区Bt棉田棉铃虫和玉米螟抗性治理关键技术体系奠定坚实的基础。对保证新疆棉花优质高效可持续发展、增强国际市场竞争力都有着非常重要和现实的意义。 选题的背景及意义 * 主要研究内容 主要研究内容 新疆北部棉铃虫和玉米螟种群敏感基线的建立 新疆北部棉铃虫和玉米螟的抗性监测 致死中浓度LC50 LC90及斜率b 抗性识别浓度LC99 抗性基因频率 研究目标及拟解决的关键问题 研究目标 测定新疆北部地区棉铃虫和玉米螟对Cry1Ac的敏感基线 棉铃虫和玉米螟对Bt的抗性监测 拟解决的关键问题 棉铃虫和玉米螟的饲养 棉铃虫和玉米螟敏感基线的确立 1.敏感基线的测定（玉米螟测定方法同棉铃虫） a.选择兵团和地方共6个采样点：147团、玛纳斯、125团、乌苏、83团、伯乐 b.生物测定采用含有0.001、0.01、0.1、0.25和1μg/mL 5个不同浓度的毒蛋白混入饲料饲养棉铃虫和玉米螟的方法： 实验方案 具体方法：将同一个地区采集的棉铃虫标记为 1~ 6组。其中1组为对照组,用同样量的蒸馏水混合饲料进行饲养, 2~ 6 号分别使用含有不同浓度毒蛋白的饲料进行饲养,每处理测试120头幼虫, 重复3次。一个地区试验共测定2160头幼虫(初孵24h 的1龄幼虫) c.采用毒蛋白饲喂后, 7 d 内观察并记录不同组中存活幼虫的数量和死亡数目 , 并计算校正得到各组的死亡率。 实验方法 2.棉铃虫抗性的测定： F1代幼虫生物测定： 采用饲料混合法（Wu K M et al.,2002），将Cry1Ac用蒸馏水稀释为1.0μg/mL饲料（诊断浓度），混入到溶化（50℃左右）的饲料中，充分搅拌均匀，倒入塘瓷盘中，置于冰箱中4℃保存备用。幼虫孵化后，用小毛笔将每个家系的初孵幼虫分别接在正常饲料（CK）和Cry1Ac饲料上，两种饲料分别接虫24头后，置于27~30℃，相对湿度为70%～80%，光周期14L:10D的气候箱中，6d后检查结果。 实验方法  实验方法 据头壳和体长判断龄期，将