土壤养分及酶活性测试方法精要.doc

硝态氮的测定：《双波长分光光度法测定土壤硝态氮》，土壤肥料，和230波长处有较强紫外吸收峰，利用双波长系数倍数法的公式：选择合适波长时，从而消除亚硝酸盐、有机质的影响。消除干扰后，硝酸盐氮的含量与，由此建立了测定土壤硝态氮的新方法。 硝酸盐氮标准比色液：称取0.7220与105℃烘箱中烘干2干燥冷却后的与小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入的容量瓶中，定容、摇匀，即为10的硝酸盐氮标准液。称取该溶液10.00于100容量瓶中，定容、摇匀，即为10的硝酸盐氮标准比色溶液。 亚硝酸盐氮标准比色液：称取0.1232于小烧杯中，加入二次蒸馏水，定量转入容量瓶中，定容、摇匀，即为100亚硝酸盐氮标准溶液。称取该溶液10.00于100容量瓶中，定容、摇匀，即为10亚硝酸盐氮标准比色液。 实验方法： 1、系数的确定： 分别准确移取10硝酸盐氮使用液2.00、10亚硝酸盐氮标准使用液2.00、土壤浸提液2.5置于各自的25比色管中，用二次蒸馏水定容、摇匀，用1的石英比色皿，以二次蒸馏水作参比，在-紫外可见分光光度计上在190～300范围内扫描，从而确定土壤样品、硝酸盐氮的最大吸收波长203，在230处吸收较弱，而亚硝酸盐氮在210处有最大吸收，在230吸收较弱。选取203、230为测量波长和参比波长测定土壤中硝态氮，从而可消除样品中主要干扰组分亚硝酸盐氮的干扰。据的公式计算，求得。 2、标准曲线的绘制： 分别去10硝酸盐氮标准比色液0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50置于25比色管中，各管加入二次蒸馏水至刻度，摇匀，用UV-紫外可见分光光度计在203和230处，用1石英比色皿测定吸光度。用的计算方法求得校正吸光度。 样品测定： 准确称取10充分拌匀的鲜土壤，分别置于100具塞三角瓶中，加入0.1和二次蒸馏水，于振荡器上振荡10。放置10后，将悬液的上部清夜用于滤纸过滤。吸取滤液1.00～20.00置于25比色管中，用水准确稀释至刻度，分别在203～230波长下测量吸光度。按下式计算土壤中硝态氮含量： 式中，为回归方程算出的含量，； D为稀释倍数； m为鲜土壤样品质量，。 铵态氮的测定：浸提-靛酚蓝比色法溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的及水溶性浸提出来。土壤浸出液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性燃染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氯范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。溶液：称取溶于水，稀释至1； （2）苯酚溶液：称取苯酚（，化学纯）10和硝基铁氰化钾()100稀释至1，此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存； （3）次氯酸钠碱性溶液：称取10、磷酸氢二钠（）7.06、磷酸钠（）31.8和次氯酸钠（，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10溶于水，稀释至，贮于棕色瓶中，在酒石酸钾钠（）的二钠盐溶液等体积混合，每混合液中加入溶液0.5；铵态氮（）标准液态：称取干燥的溶于水，洗入容量瓶后定容至，）的贮存溶液；使用前将其加水稀释）2.5的标准溶液备用。干土的新鲜土样（若是风干土，过）准确到，置于三角瓶中，加入溶液，塞紧瓶塞，在振荡机上振荡，取出静置，待土壤-氯化钾悬浊液澄清后，吸取定量上层清液进行分析。如不能在24进行分析，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。～10（含～2.5）放入容量瓶中，用溶液补充至，然后加入苯酚溶液和次氯酸钠碱性溶液，摇匀。在后，加掩蔽剂以溶解可能产生的沉淀物，然后加水定容至刻度，用比色槽在波长处进行比色，读取吸光度。标准液于容量瓶中，各加氯化钾溶液，同（）比色。含量（）=—显色液铵态氮的质量浓度（） —显色液的体积（10） —分取倍数 —样品质量（） 脲酶测定（比色法）：（《土壤微生物生态学及其实验技术》） 方法原理： 脲酶广泛存在于土壤中，它能酶促尿素分解成氨、二氧化碳和水。测定脲酶的方法很多，包括比色法、扩散法、电极法等，其中比色法最为常用，现介绍苯酚-次氯酸钠比色法，该方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用（在碱性溶液中及在亚硝基铁氰化钠催化作用下）生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。 试剂配制： （1）6.7柠檬酸盐溶液：取368柠檬酸于蒸馏水中，另取溶于水，再将两种溶液合并，用将调至。 （2）苯酚钠溶液：称取62.5苯酚溶于少量乙醇中，加甲醇和丙酮后用乙醇稀释至（液），保存于冰箱中。称取溶于水中（液），保存于冰箱中。使用前，取、两液各混合，并用蒸馏水稀释至备用。尿素溶于水中。的标准溶液：硫酸铵溶于水稀释至，则得含的标液，再将此液稀释至）. 3、操作步骤： 取5风干土置于三角瓶中，加甲苯。后加10﹪尿素溶液和20柠檬酸盐缓冲液。摇匀，。过滤，取1滤液注入容量瓶中，然后按配制标准曲线显色方法