培训课件：食品中大肠菌群的测定GB4789.3-2010精要.ppt

? 2、 初发酵试验 每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤）, 36℃±1℃ 培养24h±2h ，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。 记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。  3、 复发酵试验 用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物l环，移种于煌绿乳糖胆盐( BGLB）肉汤管中，36℃±1℃ 培养48h±2h ，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 煌绿乳糖胆盐( BGLB）肉汤管 4、 大肠菌群最可能数（MPN ）的报告 ?根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见下页表) ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的MPN 值。 注意：当检样的量与表中的量有增加或减少时，表内的数也应相应减少或增加。  结果报告： MPN 表 大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征 典型菌落为红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 2-3mm 或更大。 大肠菌群在结晶紫中性红琼脂(VRBA)上典型特征 典型菌落为紫红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 0.5mm 或更大。 大肠杆菌在MFC琼脂上的典型特征 1、 样品的稀释 按第一法中的稀释方法进行。 2、 平板计数 （1） 选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1mL。同时分别取1mL生理盐水加入两个无菌平皿作空白对照。 （2） 及时将15 mL-20mL冷至46℃ 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mLVRBA 覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±l℃ 培养18h-24h 。 ? （3） 平板菌落数的选择 选取菌落数在15-150 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。 结晶紫中性胆盐琼脂 ? （4）、 证实试验 从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36℃±1℃ 培养24h-48h ，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。 2、 平板计数 ?（5）大肠菌群平板计数的报告 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以（3）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠菌群数。 例：10-4样品稀释液1 mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取 其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105 CFU/g（mL）。 可疑菌落特点： 具有金属光泽的深紫黑色菌落； 不带或略带金属光泽的菌落； 中心色较深的淡紫黑色菌落。 三、注意事项 1、第一步乳糖胆盐发酵试验是样品的发酵结果，不是纯菌的发酵试验，初发酵阳性管，经过后两步，有可能成为阴性。只做一步，会有相当多的合格样品作为不合格处理，应注意。 2、胆盐可抑制革兰氏阳性菌的生长，有利于大肠杆菌的生长繁殖。 3、接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。 4、大肠菌群菌落在EMB琼脂上大多呈紫黑色有金属光泽或无金属光泽。应取典型菌落，如无应多取几个菌落，以免出现假阳性。 一般平板上有较多的大肠杆菌典型菌落，且革兰氏染色为阴性，可做出判定。 5、对初发酵时未产气的发酵管有疑问时，可用手轻轻敲动或摇动试管，如有气泡沿管壁上升，应考虑有气体产生，做进一步试验。 6、 MPN检索表是采用三个稀释度九管法，较理想的结果是最低3管为阳性，最高3管为阴性。如无法估测样品中的菌数时，应做一定范围的稀释度。 7、 MPN检索表只提供了3个稀释度，若改用其它浓度时，表内数字应相应增加或减少。 谢谢! GB4789．3-2010 一、? 目的 1、??了解大肠菌群的定义及食品中大肠菌群测定在食品卫生检验中的意义。?? 2、练习并掌握大肠菌群的检验方法?。 二、原理 1、大肠菌群 大肠菌群系指一群在一定条件下（37℃、24小时）能够发酵乳糖、产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化鉴定试验，可将大肠菌群细分为大肠埃希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗