大肠埃希杆菌性胃肠炎精要.ppt

实验室检查 在每株菌的菌苔上放一片多黏菌素B纸片，于36℃经5～6h，使肠毒素渗入琼脂中。在离菌苔各5mm处的中央，挖一个直径4mm的圆孔，并用一滴琼脂垫底。在孔内滴加LT抗毒素30l，并用已知产LT和不产毒菌株作对照。于36℃培养15～20h观察结果。在菌斑和抗毒素孔之间出现白色沉淀带者为阳性，否则为阴性。 b.乳鼠灌胃试验： 将被检菌株接种于Honda产毒肉汤内，于36℃培养24h，3000r/min离心30min，取上清液经薄膜滤器过滤，60℃加热30min，每毫升滤液内加入2%伊文思蓝溶液0.02ml。 实验室检查 将此滤液用塑料小管注入1～4天龄的乳鼠胃内0.1ml，同时接种3～4只。禁食3～4h后用氯仿麻醉，取出全部肠管，称量肠管(包括积液)重量及剩余的体重。肠管重量与剩余体重之比大于0.09为阳性，0.07～0.09为可疑。 c.家兔结扎回肠段试验： 将被检菌株接种于Honda产毒肉汤，于36℃培养24h，3000r/min离心30min，取上清液经薄膜滤器过滤。滤液分成两份，一份不加热，供测LT用；另一份60℃加热30min，供测ST用。取体重2kg家兔，禁食1天。 实验室检查 麻醉后剖腹，取出回肠段，按10～15cm为一段，分段结扎。取一段注射肉汤2ml作为阴性对照，另一段注射已知产毒菌肉汤培养物的滤液2ml作为阳性对照。其他各段分别注射待试菌株肉汤培养物的滤液2ml，将腹壁缝合。测定ST时，于注射后6～8h剖腹检查；测定LT时，于注射后18h剖腹检查。抽取各肠段内的滤液，测定其容量，并测定肠段的长度。积液量(ml)与肠段长度(cm)之比大于1为阳性。 d.血清学试验： 肠毒素试验阳性菌株可用ETEC有关的多价O血清及单价血清作玻片凝集试验，以确定其O抗原。 实验室检查 ④侵袭性大肠埃希杆菌： A.生化试验： 于鉴别平板上挑取菌落3～5个，一般应多挑取与志贺菌相似的不发酵乳糖的菌落，但发酵乳糖的优势菌落亦可适当挑取。将挑取的菌落接种半固体管，36℃培养18～24h。有动力的菌株一般可以弃去，除非经血清学鉴定为0124。留下无动力的菌株，接种三糖铁琼脂，悬挂靛基质试纸片，36℃培养18～20h。同时并作赖氨酸脱羧酶试验。EIEC的典型生化特性为： 乳糖、蔗糖不产酸或产酸，葡萄糖产酸、产气或不产气，H2S阴性，靛基质阳性，赖氨酸脱羧酶阴性，除O124外均无动力。 实验室检查 赖氨酸脱羧酸试验亦可以放在血清学试验以后做。 B.血清学试验： 挑取三糖铁琼脂培养物，用EIEC的两个多价O血清作玻片凝集试验，以确定其O抗原的成分。 C.豚鼠角膜试验： 将菌液滴入豚鼠眼内2～5天内观察是否有红肿、流泪、充血症状。 D.ELISA试验： 用已知EIEC或志贺菌属的有毒菌株免疫家兔，所得之免疫血清用同型的无毒菌株吸收。用ELISA法测定，EIEC各型的有毒菌株及志贺菌属各型的有毒菌株均为阳性。 实验室检查 此法系检测被检菌的侵袭性多肽，亦可采用基因探针法检测。 ⑤集聚性大肠埃希杆菌： 集聚性大肠埃希杆菌(EAEC)的重要特征是在Hap-2细胞周围形成特征性的集聚性黏附。Yamamoto发现在37℃培养时，EAEC的此种聚集性黏附可发生在某些液体培养基的生长表面，形成很厚的黏附聚集性菌块。在25℃或42℃则无此现象，液体培养基以L或M-H培养基最佳，以此可作为EAEC的初步鉴定手段。液体培养基中菌块形成试验： 大肠埃希杆菌接种于M-H液体培养基(Difco)，35～37℃温育18～24h，凡表面(部分下沉管底)形成菌块者为阳性，均匀混浊无菌块者为阴性。 实验室检查 1996年王梅等对肠道凝聚性-黏附性大肠埃希杆菌进行简易筛查试验，将M-H培养基上的菌块形成试验与Hep-2细胞黏附试验进行对比，发现两者的一致率达77%，如包括弥散型和局限型在内则达88.5%。表明菌块形成试验是可靠的初步筛查EAggEC的方法。 诊断 在流行期间，凡是腹泻的婴幼儿，应首先考虑为大肠埃希杆菌性胃肠炎，先隔离治疗，等待病原学检查确诊。在非流行期，特别是散发病例，仅靠临床常难以诊断，必须结合病原学、血清学检查确诊。 鉴别诊断 引起腹泻的病因比较复杂，有细菌、病毒、寄生虫等，某些化学药品亦可导致腹泻。大肠埃希杆菌肠炎应注意与下列疾病鉴别。 1.细菌性痢疾 由志贺菌属引起，腹泻以脓血或黏液状便较常见，量少，并常有里急后重，多有寒热。粪便镜检可发现大量脓细胞、红细胞和吞噬细胞。婴幼儿中毒型菌痢或非典型菌痢应以病原学诊断来鉴别。 2.霍乱弧菌 引起