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实验十九 维生素C含量的测定（2,6-二氯靛酚滴定法）实验原理还原型VC可以还原2,6-二氯靛酚染料。该染料在酸性介质中呈浅红色，被还原后红色消失。还原型VC还原染料后，本身被氧化成脱氧抗坏血酸。在无杂质干扰时，一定量的样品提取液还原染料的量与样品中所含还原型抗坏血酸的量成正比，根据染料用量就可计算样品中还原型抗坏血酸含量。仪器与试剂仪器高速组织捣碎机、分析天平试剂1%草酸溶液：称取10g草酸（C2H2O4.2H2O）溶解于水病稀释至1L；2%草酸溶液：称取20g草酸溶解于水并稀释至1L；1%淀粉溶液：称1g淀粉溶解于100ml水中加热煮沸，边加热边搅拌；6%碘化钾溶液：称6g碘化钾溶解于100ml水中0.001mol/L碘酸钾标准溶液：精确称取干燥的碘酸钾0.3567g，用水稀释至100ml，取出1ml，用水稀释至100ml，此溶液1ml相当于抗坏血0.088mg；抗坏血酸标准溶液：准确称取20mg抗坏血酸，溶于1%草酸中并定容至100ml，置冰箱中保存。用时取出5ml，置于50ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，配成0.02mg/ml的标准使用液；标定：吸取标准使用液5ml于三角瓶中，加入6%的碘化钾溶液0.5ml，1%淀粉溶液3滴，再以0.001mol/L碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。 计算C= 式中：C------抗坏血酸标准溶液的浓度，mg/ml； V1----滴定时消耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的体积，ml；V2----滴定时所取抗坏血酸标准溶液的体积，ml；0.088----1ml0.001mol/L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量mg/ml2,6-二氯靛酚钠溶液配制：称取52mg碳酸氢钠（NaHCO3)溶解在200ml沸水中，然后再称取50mg2,6二氯靛酚钠溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷却，保存在冰箱中过夜。次日过滤250ml棕色容量瓶中，定容。标定：吸取5ml抗坏血酸标准溶液，加1%草酸溶液5ml，摇匀，用2,6-二氯靛酚钠溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。T=式中 T-----每毫升2,6二氯靛酚钠溶液相当于抗坏血酸的毫克数，mg/ml； C-----抗坏酸的浓度，mg/ml V1----抗坏血酸标准溶液的体积，ml V2----消耗2,6-二氯靛酚钠的体积，ml实验步骤样液制备样制备：称100g鲜样，放入组织捣碎机中，加2%草酸100ml迅速捣成匀浆。取10~40g匀浆，用2%草酸定容至100ml容量瓶中，（若有泡沫可加入2滴辛醇除去），摇匀放置10min过滤。若滤液有色，可按每克样品加0.4g白陶土脱色后再过滤多汁果蔬样品制备：榨汁后，用棉花快速过滤，直接量取10~20ml汁液（含抗坏血酸1~5mg），立即用2%草酸浸提剂定容至100ml，待测。测定吸取5ml或10ml滤液于100ml三角瓶中，用已标定过的2,6-二氯靛酚钠溶液滴定，直到滤液呈粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。结果计算式中：X----样品中VC的含量，mg/100g V-----滴定样液时消耗染料溶液的体积，ml V0----滴定空白时消耗染料溶液的体积，ml T------1ml染料溶液相当于抗坏血酸溶液的量，mg/ml m-----滴定时所取滤液中含有样品的质量g注意事项本方法适用于水果、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价锡、二价铜、亚硫酸盐或硫代硫酸盐）。动物性样品，须用10%三氯醋酸代替草酸溶液提取实验二十七 亚硝酸盐的测定（盐酸奈乙二胺法）实验原理亚硝酸盐在酸性条件下，与对氨基苯磺酸（HZN-C.6HS S03H）发生重氮化反应生产重氮盐，此重氮盐再与盐酸奈乙二胺发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。其颜色深浅与亚硝酸含量成正比，故可比色测定。实验仪器与试剂仪器分光光度计、组织捣碎机试剂饱和硼砂溶液：5g硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）溶于100ml热的重蒸水中，冷却备用亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水，并稀释至1000ml乙酸性溶液：称取220g乙酸锌，加30ml冰醋酸溶于水，并稀释至1000ml果蔬抽提液：溶解50g氯化汞(HgC12)和50g氯化钙（BaC12）于1000ml重蒸水中，用浓盐酸调整PH值为1氢氧化铝乳液:溶解125g硫酸铝于1000ml重蒸水中，滴加氨水使氢氧化铝全部沉淀（使溶液呈微碱性）。用蒸馏水反复洗涤，真空抽滤，直至洗液分别用氯化钡、硝酸银溶液检验不发生浑浊。取下沉淀物，加适量重蒸水使之呈薄糊状，搅拌均匀备用0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100ml20%的盐酸溶液中避光保存0.2%盐酸奈乙二胺溶液：称取0.2g盐酸奈乙二胺，溶于100ml重蒸水中亚硝酸钠标准溶液（5μg/ml）：精确称取0.1000g亚硝酸钠（优级纯）