LC-MS定量研究报告.pptx

绝对定量方法(LC) 刘富发常用方法 外标法 内标法 简便、快速 系统误差大(检测器的响应性能、柱温、流动相流速及组成、进样量、柱效等，样品前处理) 克服色谱条件差异，进样量不准 合适的内标物 外标法 配一系列浓度标样(6~8) 母液 6 稀释 5 稀释 4 稀释 3 稀释 2 稀释 1 稀释 内标法 标样母液 + 内标标样 6 5 4 3 2 1 标样溶质浓度依次升高 内标标样浓度一致 内标物的要求 ?化学结构与待测组分相似(同系物、异构体) ?在样品中不存在 ?不与样品中组份发生任何化学反应 ?保留值与待测组分接近 ?浓度（响应值）与待测组分相当 ?其色谱峰与其它色谱峰分离好 选择性 色谱分离条件(固定相，流动相，疏水性，检测器) 分离度 峰高、峰面积 痕量分析 t—保留时间；w—半高峰宽 精密度 重现性（日内，日间），保留时间、峰面积 5次重复，三种不同含量水平（不同含量的精密度要求不同） LLOQ CV20%;其他 CV15% ?峰积分不一致 ?进样或进样器有问题 ?样品分解或制样时引入了杂质 ?色谱问题 ?检测器响应变化 精密度的影响因素 准确度 对比成熟方法 对比已知含量的标准物 一定量参比物加入到空白基质(回收率) 测量值与真实值的误差 ?峰面积积分不正确 ?样品分解或制样时导入杂质 ?样品瓶不密封,样品或溶剂挥发 ?制样不正确 ?进样问题 ?内标制备不正确 相关系数 标准曲线的线性范围 A:杂质未分开 B:检测器响应非直线 C:理想状态 D:样品损失 6种不同浓度，测量值50%-150% 检测限、定量限 检测限 SNR3 定量限 SNR10 SNR20 稳定性 (低、高浓度) 样品反复冻融 室温下日内变化(4-24h) 样品前处理 样品长时间的稳定性 样品重复测定（RSD20%） 耐用性 温度 湿度 操作者 仪器 试剂 色谱柱 抵制误 操作能力 小结 操作准确(枪、电子天平、容量瓶) 仪器稳定性 实验条件的一致性 样品稳定性 谢谢！