定量pcr方法和数据剖析.pptVIP

下载本文档

6
0
约4.45千字
约 23页
2017-03-30 发布于北京
举报
版权申诉

定量pcr方法和数据剖析.ppt

1、本文档共23页，可阅读全部内容。
2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

定量pcr方法和数据剖析

定量PCR原理、应用及数据分析 ZJW Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 原理： PCR（多聚酶链式反应)：一种体外扩增特异DNA片段的技术。反应分为变性（denaturation）、退火（annealing）、延伸（extension）三步。 PCR扩增理论方程： Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 起点定量与终点定量：起点的DNA量为“天然”的含量，更有意义；终点的DNA量为经过PCR过程 “加工”的量，存在部分“失真”。（终点定量存在更大的误差） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 定量PCR：通过实时监测PCR每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量或者定性的分析化学原理：荧光染料嵌合法, 探针法 SYBR Green I（不饱和型），Eva Green / LC Green（饱和型），与dsDNA小沟部位嵌合，具有绿色激发波长。游离时不发光。缺点：需用melting curve检测产物特异性。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 探针法：可用于多重PCR及基因分型 TaqMan 探针：检测积累荧光一种寡核苷酸探针, 探针两端各锚定一个基团，淬灭剂则在3‘末端。 Taqman探针识别并结合特定的靶序列；探针完整时，报告基团R发出的荧光被淬灭基团Q吸收；在进行延伸反应时,Taq聚合酶的 5’外切酶活性将探针切断, 使得荧光基团与淬灭剂分离,发射荧光。一分子的产物生成就伴随着一分子的荧光信号的产生。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 基线：扩增曲线中的水平部分阈值（Threshold):指扩增曲线的指数增长区域内适当位置上设定的荧光检测界限。 Ct值：从基数到指数增长的拐点所对应的循环次数 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 定量PCR数学原理 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 定量PCR技术的应用定性分析：病毒病原菌检测、生物品种鉴定、SNP分析等、基因突变分析等绝对定量：基因拷贝数分析，病毒病原菌定量分析等相对定量：mRNA表达分析，siRNA表达分析等 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 定量PCR实验流程目标基因的查找、比对引物、探针的设计与合成反应体系和条件的优化数据分析 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 定量PCR引物设计的要求： ① Tm=55-65℃ ② GC=30-80% ③ PCR 扩增产物长度：引物的产物大小不要太大，一般在 80-300bp 之间都可。 ④ 引物的退火温度要高，一般要在 60℃以上。 Evaluation only. Crea