实验五-分枝杆菌-铜绿假单胞菌.pptVIP

实验五：分枝杆菌 铜绿假单胞菌 霍乱弧菌 实验目的 掌握结核分枝杆菌的基本特征和常用鉴定方法。 掌握临床标本中检查抗酸杆菌的方法。 实验内容 1、示教：卡介苗（减毒结核分枝杆菌）在罗氏培养基上的生长表现。 2、痰标本直接涂片检查抗酸杆菌：抗酸染色法。 示教：卡介苗（减毒结核分枝杆菌）在罗氏培养基 上的生长表现。 改良罗氏培养基是专门用于分枝杆菌的分离 培养的，主要成分为甘油、鸡蛋液、马铃薯 粉、孔雀绿。 结核分枝杆菌的培养特性： 1、懒：初次分离需2-8周才能看到菌落，一代需要18 小时。 2、馋：营养要求高，专性需氧。 3、丑：菌落呈菜花样，干燥、粗糙、灰白或灰黄，凸 起。 痰标本直接涂片检查抗酸杆菌 涂片：标本经适当处理后直接涂片或厚膜涂片。用接种环直 接挑取标本中脓性或干酪样部分痰，制成 20MMX25MM大小的均匀薄涂片，或经多次薄涂片制 成厚涂片。自然干燥后火焰固定。 抗酸染色：1、初染：将涂片用夹子夹住，表面覆盖一层吸 水纸，滴加石碳酸复红，并在载玻片下方用弱火加热 至出现蒸汽（勿煮干或煮沸），随时补充染料以防干 涸，持续5分钟，水洗。 2、脱色：用3%盐酸酒精脱色，直至无红色染液 脱下，水洗。 3、复染：用美兰染1分钟，水洗，吸干，在油镜 下观察。 结果观察：淡蓝的背景下可见染成红色的细 长或略带弯曲的杆菌，有分枝生长 趋向，此即为抗酸阳性杆菌，其他 细菌或细胞被染成蓝色，根据各 实验室的标准报告：-，+，+， ++，+++，++++。 结核分枝杆菌镜下形态 铜绿假单胞菌的鉴定 1、培养特点及菌落特征：在普通琼脂平板上产生特征性的 蓝绿色水溶性绿脓素和黄绿色青脓素，血平板上形成大而扁平，湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿色菌落，并形成透明溶血环。 2、95%以上的铜绿假单胞菌可通过观察以下几个特征而得到鉴定： 氧化酶阳性（10秒内）。 菌落较大，生姜样气味。 绿脓素产生。 少数铜绿假单胞菌可产生其他颜色色素，如红脓素（红色），黑脓素（棕色到黑色），青脓素（黄色）。 * Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Eval