中国人类遗传资源.PDF

www .eg ene .or g.c n www .eg ene .or g.c n 中国人类遗传资源 人类遗传物质质粒文库建立技术规程 Technical Specification of Establishing the Plasmid Library of Hunan Hereditary Material （讨论稿） 中国人类遗传资源平台 2007 年 3 月 www .eg ene .or g.c n www .eg ene .or g.c n 前 言 人类基因组计划的完成，在人类揭示生命奥秘、认识自我的漫漫长路上又迈 出了重要的一步。同时也提出了新的挑战。科学家将对人类基因组进行更加深入 的研究，一方面寻找不同人群之间的基因差异，一方面破译不同基因的功能，以 取得更多的数据，为人类战胜疾病、提高生命质量提供更多的参考。因此构建人 类遗传物质质粒文库势在必行。人类遗传物质质粒文库的构建将为开展重大疾病、 重要生理功能相关功能基因、中华民族单核苷酸多态性的开发应用提供丰富的资 源。为了合理有效保存、开发、利用人类遗传资源，结合实际工作要求，特制定 人类遗传物质质粒文库建立规程。 人类遗传物质质粒文库建立规程不同于一般遗传物质的保存规程，需要多种 遗传资源的整合。提取人类遗传物质，涉及人类基因组 DNA、RNA 及特异染色体 的基因文库构建。本规程包括人类基因组 DNA 文库的建立、cDNA 文库的建立、 人类特异染色体基因文库建立等技术流程。 II www .eg ene .or g.c n www .eg ene .or g.c n 目 次 1 范围 ............................................................ 1 2 规范性引用文件 .................................................. 1 3 术语和定义 ...................................................... 1 4 实验室设置和设备 ................................................ 2 5 人类基因组DNA文库构建 ........................................... 3 5.1 分离基因组DNA（gDNA） ......................................... 3 5.2 载体选择 ...................................................... 3 5.3 基因组 DNA 文库的构建流程：应用黏粒载体构建基因组DNA文库 ...... 4 6 人类cDNA文库构建 ............................................... 10 6.1 总RNA（Total RNA）的提取：TRIzol试剂提取总RNA ................ 10 6.2 mRNA的分离 ................................................... 10 6.3 cDNA的甲基化 ................................................. 16 6.4 接头或衔接子的连接 ........................................... 17 6.5 Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA ............................ 18 6.6 cDNA与λ噬菌体臂的连接 ....................................... 19 6.7 cDNA与质粒载体连接 ........................................... 20 7 染色体特异基因文库构建 ......................................... 25 7.1 中期染色体显微切割标本的制备 .................................. 25 7.2 染色体显微切割、PCR 及探针池的制备 ........................... 26 7.3 DNA微抽提及连接 .............................................. 26 7.4 染