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中国人类遗传资源
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中国人类遗传资源
人类遗传物质质粒文库建立技术规程
Technical Specification of Establishing the Plasmid
Library of Hunan Hereditary Material
(讨论稿)
中国人类遗传资源平台
2007 年 3 月
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前 言
人类基因组计划的完成,在人类揭示生命奥秘、认识自我的漫漫长路上又迈
出了重要的一步。同时也提出了新的挑战。科学家将对人类基因组进行更加深入
的研究,一方面寻找不同人群之间的基因差异,一方面破译不同基因的功能,以
取得更多的数据,为人类战胜疾病、提高生命质量提供更多的参考。因此构建人
类遗传物质质粒文库势在必行。人类遗传物质质粒文库的构建将为开展重大疾病、
重要生理功能相关功能基因、中华民族单核苷酸多态性的开发应用提供丰富的资
源。为了合理有效保存、开发、利用人类遗传资源,结合实际工作要求,特制定
人类遗传物质质粒文库建立规程。
人类遗传物质质粒文库建立规程不同于一般遗传物质的保存规程,需要多种
遗传资源的整合。提取人类遗传物质,涉及人类基因组 DNA、RNA 及特异染色体
的基因文库构建。本规程包括人类基因组 DNA 文库的建立、cDNA 文库的建立、
人类特异染色体基因文库建立等技术流程。
II
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目 次
1 范围 ............................................................ 1
2 规范性引用文件 .................................................. 1
3 术语和定义 ...................................................... 1
4 实验室设置和设备 ................................................ 2
5 人类基因组DNA文库构建 ........................................... 3
5.1 分离基因组DNA(gDNA) ......................................... 3
5.2 载体选择 ...................................................... 3
5.3 基因组 DNA 文库的构建流程:应用黏粒载体构建基因组DNA文库 ...... 4
6 人类cDNA文库构建 ............................................... 10
6.1 总RNA(Total RNA)的提取:TRIzol试剂提取总RNA ................ 10
6.2 mRNA的分离 ................................................... 10
6.3 cDNA的甲基化 ................................................. 16
6.4 接头或衔接子的连接 ........................................... 17
6.5 Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA ............................ 18
6.6 cDNA与λ噬菌体臂的连接 ....................................... 19
6.7 cDNA与质粒载体连接 ........................................... 20
7 染色体特异基因文库构建 ......................................... 25
7.1 中期染色体显微切割标本的制备 .................................. 25
7.2 染色体显微切割、PCR 及探针池的制备 ........................... 26
7.3 DNA微抽提及连接 .............................................. 26
7.4 染
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