梅毒的实验室检查讲述.ppt

梅毒螺旋体抗体血清学试验： 检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（ IgG 和IgM ）。 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。 实验方法 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB） TPPA/TPHA原理 TPPA试验原理与TPHA试验基本相同 TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞 特点 梅毒螺旋体(Nichols株)全抗原 操作步骤 1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。??? 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板孔内，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔，混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4℃冰箱过夜观察结果。 结果判断 1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为有效试验。 2. 观察凝集反应强度：分级如下。 4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。? ?? 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 ??? 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+：?颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环。? ?±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。  ??一：颗粒紧密沉积孔底中央。 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 原理 将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异硫氰酸荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。 TP-ELISA 原理 用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。 特点 本法可用于大规模血清检测。 梅毒螺旋体抗体测定(ELISA法)结果的解读 阴性对照OD≤0.1，阳性对照OD＞0.8时实验正常，否则实验无效。计算方法：cut-off(co)值=0.12+阴性对照平均OD值，s/co值=病人OD值/ cut-off(co)值，s/co值大于或等于1判为阳性，s/co值小于1判为阴性 注s/co值在0.5~2.0之间的灰区样本需复检确认后报告 免疫层析 临床应用 梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验 它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。 一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。 方法特点 特异性强，敏感性高 很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有1%的生物学假阳性发生。 如系统性红斑狼疮患者血清可使FTA-ABS试验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。 传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使TPHA呈假阳性。 麻风患者也可使特异试验呈阳性。 临床意义 作为RPR初筛阳性标本的确证试验。 不能作为疗效观察的指标。 阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合RPR结果进行诊断。 假阳性问题 存在交叉反应的抗体 处理方法：用Reiter株吸收血清中交叉反应的抗体。 老年人抗体阳性的问题 1、真阳性 2 、假阳性：这些老年患者所患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或抗T.pallidum抗体的交叉抗原； 梅毒检测流程图 A1(ELISA) A1+ A1- A2(PRP或TRUST） A1+A2+ 感染：既往或现在 A1+A2- A3（TPPA） A1+A2-A3+ 可能是梅毒感染 需结合临床表现 A1+A2-A3- 基本排除梅毒 潜伏期 美国2009年指南 梅毒血清学试验结果的临床意义 RPR TRUST TPPA TP-ELISA 临床意义 阴性 阴性 排除梅毒 （一期梅毒的早早期） 阳性 阳性 现症梅毒 (梅毒孕妇所生的婴儿除外) 阳性 阴性 生物学假阳性 阴性 阳性 早期梅毒经治疗后 （早期梅毒） RPR结果解释示意图 治疗前 治疗后 早 期 一期 二期 早期潜伏 晚 期 晚期潜伏 三期 阳性 阴性 TPPA结果解释示意图 治疗前 治疗后 早