植物组织石蜡切片的制作222讲述.ppt

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植物组织石蜡切片的制作222讲述

植物组织石蜡切片的制作 一、实验目的 1.熟练掌握石蜡切片的方法。 2.掌握永久制片的制作过程,为研究植物的内部结构奠定基础。 3.学会植物内部结构的比较研究方法。 二、实验器具与试剂 1.器具 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。 2.试剂 10%番红水溶液、0.5%固绿(用95%的酒精配制)、酒精(100%、95%、80%、70%、50%)、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。 三、实验材料 幼嫩植物各部分,根据季节选择材料。 四、实验内容与方法 石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。它是把材料封埋在石蜡里面,用旋转切片机切片,可以切出很薄的切片。凡是精细的工结构,大都用石蜡切片。全都过程如下: 1.固定 2.洗涤 3.脱水与硬化 4.脱酒精 2.封埋 6.切片 7.粘片 8.脱蜡 9.染色 10.脱水 11. 透明 12.胶封 实验二 1、石蜡切片技术—固定、染色 一、实验目的: 掌握制作石蜡切片中固定、染色、返蓝的基本操作技术 二、实验原理: 石蜡切片法:是用石蜡浸透到组织中,并包埋组织,然后用旋转切片机将蜡块切成切片。只是切片中最常用的一种方法。 三、实验用品: 1.实验材料:瓜叶菊叶柄,长寿花幼茎。 2.实验试剂:卡诺固定液、FAA固定液、35%酒精、50%酒精、70%酒精、83%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、中性树胶、2% 氨水、爱氏苏木精染液。 3.实验器具:解剖器,双面刀片,青霉素小瓶。 四、实验步骤: 1.取材:依据生物组织取材的各项注意事项。 2.固定:卡诺固定液、FAA固定液固定24小时。 3.复水:卡诺固定液(1h)→50%酒精(1h)→爱氏苏木精染液 FAA固定液→爱氏苏木精染液 4.染色(整染):爱氏苏木精染液染色,染色时间视材料不同而有所不同,总之使材料最后染指红棕色为止,且内外均染色均匀。对于染不好的材料,可加长染色时间,还可通过负压,超声波加注浸剂等方法提高染色效率。时间为1-2天。 5.返蓝:染好的材料,用自来水冲洗,加2% 氨水使材料变为蓝色,时间也因材料的不同而有所不同,好返蓝的材料用水一洗就蓝。 附:分染:番红与固绿色法 番红用l%的水溶液,固绿用0.5%的酒精液(用95%的酒精配制),染色步骤如下: 讨论和注意点: (1) 用番红和固绿这个组合染成的切片,木化、栓化和角质的细胞壁,被番红染成鲜红色,纤维素的细胞璧,被固绿成绿色。就维管束来讲,木质部染红,韧皮部染绿,区别极清楚。 (2) 在50%酒精中脱色,需经实践,如脱色不够,绿色难得染好,脱色太过分,做出来的切片,红色太淡,甚至于全是绿色,失掉了二色染法的用意。 实验二 2、石蜡切片技术—脱水、透明、浸蜡、包埋 一、实验目的: 掌握制作石蜡切片中脱水、透明、浸蜡、包埋的基本操作技术。 二、实验用品: 1.实验试剂:35%酒精、50%酒精、70%酒精、83%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、石蜡。 2.实验器具:电光纸、电热恒温箱、烤片机、解剖器、盆。 三、实验步骤: 1.脱水:35%酒精→50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级1-2h。70%酒精处可长期保存。 2.透明:1/2二甲苯+1/2100%酒精 (1-2h) →纯二甲苯(1h) →纯二甲苯(1h) 3.浸蜡:石蜡先置于60℃的温箱中,倒入含二甲苯及材料的小瓶中置于38℃温箱中,放置2-4小时。 4.包埋:先提升恒温箱的温度至60℃,换纯蜡3次,每次1-2h,用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒,置于45-60℃的烫板上,倒入材料,摆放好材料,把标签(正面向外置于底部),补足石蜡,倒好后轻轻的置于冷水盆中,注意底面要接触盆中凉水,待石蜡全部凝固后可取出晾干,也可在凉水盆中放置过夜。 实验二 3、石蜡切片技术—切片、粘片、脱蜡、透明、封藏 一、实验目的: 掌握制作石蜡切片中切片、粘片、脱蜡、透明、封藏的基本操作技术。 二、实验用品: 1.实验试剂: 95%酒精、100%酒精、二甲苯、蒸馏水、加拿大树胶。 2.实验器具:切片机、烤片机、解剖器、载玻片、盖玻片、酒精灯、木筷、染色缸。 三、实验步骤: 1.修块、粘块、整修的步骤: ①选取所要切片的材料,从包埋的石蜡块上用单面刀片切割下来,注意不可损伤包埋的组织。 ②确定切面的方位,用刀片将石蜡块的四面作初步的整修。保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。 ③点燃酒精灯,并准备一把旧的解剖刀。 ④左手大拇指与食指间持整修好的石蜡块,材料向上用其余三指夹住台木。此时将解剖刀在酒精灯上加温后,即放在台木与石蜡块之间,因解剖刀已加温,遇上两面的石蜡都会融化,可立即将解剖刀抽出

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