毛细管电泳技术及应用讲述.ppt

毛细管电泳技术及应用 电 泳 经典电泳 毛细管电泳（Capillary Electrophoresis, CE） 分离过程 毛细管电泳的特点 一、CE基本原理 二、电渗现象与电渗流electroosmotic flow 三、影响电渗流的因素 四、淌度mobility 五、CE中的参数与关系式 六、影响分离效率的因素 毛细管电泳(CE)基本原理 电渗现象与电渗流 electroosmosis and electroosmotic flow 2.HPCE中的电渗现象与电渗流 3. CE中电渗流的大小与方向 CE中电渗流的方向 4. CE中电渗流的流形 5. CE中电渗流的作用 CE中影响电渗流的因素 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响 淌度 Mobility CE中的参数与关系式 3.分离度 影响分离效率的因素—区带展宽 3.焦耳热与温度梯度的影响 4.溶质与管壁间的相互作用 5.其他影响因素 一、高效毛细管电泳仪 二、流程与主要部件 三、进样方式 四、检测器 仪器流程与主要部件 1.高压电源 3.缓冲液池 3）毛细管电泳的进样方式 2. 电动进样方式 Buffer: 50 mM phosphate –TEA (pH 2.5) with 4.0% HP-β-CD (w/v) and 50% methanol; Applied potential: 30 kV; Sample: 1 mg/L propranolol dissolved in (A) (B) water, (C) methanol; (A) Pressure injection 0.5 psi., 5 s, (B) (C) electrokinetic injection 10 kV, 5 s. (A)Conditioning of the capillary with a low pH buffer containing CTAB, and injection of a long water plug into the capillary by pressure; (B) Field-amplified injection of cations and stacking on the boundary of water plug and the BGS, while removing of the water plug out of the capillary; (C) Separation voltage is applied. The enantiomers complex with CD and are separated, and the rest of water plug is removed. 分离模式 一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE 二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE 三、 胶束电动毛细管色谱（MEKC）Micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 四、毛细管等电聚焦 Capillary isoelectric focusing，CIEF 五、毛细管等速电泳 Capillary isotachophoresis ，CITP capillary isotachophoresis ，CITP 六、毛细管电动色谱 Capillary electrokinetic chromatography ，CEC 七、毛细管微乳电动色谱(Microemulsion electrokinetic chromatography, MEEKC) 苋菜根、茎、叶样品溶液电泳图 （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：0.1%； （5）电源极性易转换； 2. 毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度=1m 化学惰性，机械稳定性好； 4. 检测器 要求：具有极高灵敏度，可柱端检测； 检测器、数据采集与计算机数据处理一体化； 类型 检测限/mol 特点 紫外-可见 10-13～10-15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10-18～10-20