分解纤维素的微生物的分离讲义.pptx

课题3 分解纤维素的微生物的分离 专题二 微生物的培养与应用 纤维素是一种由葡萄糖首位相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。 1、 纤维素在生物圈的分布状况？ 　 植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 一、纤维素和纤维素酶 2、纤维素酶的组成及作用？ 　　纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 ①取二支20mL的试管 3、实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②各加入一张滤纸条 ③各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失 讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？ 二.纤维素分解菌的筛选 ① 筛选纤维素分解菌的方法 。该方法可以通过________反应直接筛选。 刚果红染色法 颜色 ② 其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________， 当纤维素被 分解后，红色复合物无法形成， 出现以 为中心的 ，可以 通过___________ __ 来筛选纤维素分解菌。 红色复合物 纤维素酶 纤维素分解菌 透明圈 是否产生透明圈 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 三、实验操作 ① 取样环境： 富含纤维素的环境中 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 ② 原因 土壤取样 ③ 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 ④ 讨论:如果找不到合适的环境，可将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。 1、选择培养的目的： 　　增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物 选择培养 培养基成分分析 培养基组成 提供主要的营养物质 纤维素粉 5g 碳源（能源） NaNO3 1g 氮源、无机盐 KCl 0.5g Na2HPO4·7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 ·7H2O 0.5g 无机盐 酵母膏 0.5g 生长因子、碳源、氮源 水解酵素 0.5g 氮素、生长因子 溶解后，蒸馏水定容至1000mL 水 2、制备选择培养基 提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。 A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 是液体培养基，原因是配方中无凝固剂（琼脂） B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。 C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 3、操作方法： 　　将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养 　　思考：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 　　在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。 梯度稀释 1、 制备培养基:　　参照旁栏中的比例 2、 涂布平板：　　将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30℃倒置培养 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 培养基组成 提供的主要营养物质 CMC-Na 5~10g 碳源 酵母膏 1g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25g 无机盐 土豆汁 100mL 碳源、生长因子 琼脂 15g 凝固剂 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至