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流式细胞术应用与进展 (Flow Cytometry, FCM) 一、流式细胞术 二、流式细胞仪发明过程 二、流式细胞仪发明过程 四、流式分析常用荧光素 四、流式分析常用荧光素 四、流式分析常用荧光素 四、流式分析常用荧光素 五、流式细胞术的参数与数据 前向角散射光 -- FSC 前向角散射光 -- FSC 侧向角散射光 -- SSC 侧向角散射光 -- SSC 基于FSC和SSC的全血散点图 基于FSC和SSC的组织细胞散点图 荧光强度 (Fluoresence intensity) 染色细胞的相对荧光强度 染色细胞的相对荧光强度 六、流式细胞分选原理 六、流式细胞分选原理 七、流式细胞术的应用 细胞周期分析 细胞周期分析 细胞周期分析 细胞周期分析 细胞凋亡分析 细胞凋亡分析（Annexin V/PI） 细胞凋亡分析（Annexin V/PI） 细胞凋亡分析（Annexin V/PI） 细胞凋亡分析（Annexin V/PI） 细胞凋亡分析（Annexin V/PI） 细胞凋亡分析（Annexin V/PI） 细胞凋亡分析（Annexin V/PI） 流式多色分析 流式多色分析 流式多色分析 流式多色分析 流式多色分析 质谱流式细胞术 (Mass Cytometry) 质谱流式细胞术 (Mass Cytometry) 质谱流式细胞术 (Mass Cytometry) 质谱流式细胞术 (Mass Cytometry) 质谱流式细胞术 (Mass Cytometry) 八、文献阅读 生物医学分析测试中心 结果解读： Biomedical Analysis Center 细胞凋亡检测结果 Biomedical Analysis Center 注意事项： 1. 设置必需的对照 阴性对照、Annexin V单染、PI单染 2. 洗涤细胞时应轻柔，减少对细胞的机械损伤 3. 根据细胞特性，选择合适的离心条件 4. 选择多种凋亡分析方法 Biomedical Analysis Center 阴性对照结果图例 阴性对照： 确定阴性细胞和阳性细胞的界线。 Biomedical Analysis Center 发射光谱交叠 Annexin V/PI单染： 不同荧光素发射光谱交叠，导致假阳性产生。 调节补偿，避免假阳性引起的实验结果错误。 Biomedical Analysis Center 未调补偿 调节补偿后 Biomedical Analysis Center 应用： 检测同一细胞上和/或细胞内多种分子的表达 荧光抗体选择原则： 根据目标分子情况，选择相应荧光抗体。 不同荧光抗体上的荧光素不同。 不同荧光素的最大发射波长相差越大越好。 流式细胞仪检测： Biomedical Analysis Center 设置欲分析检测的目的细胞门 结果解读： Biomedical Analysis Center 注意事项： 1. 根据流式细胞仪选选择荧光抗体 激光器：488nm、635nm、355nm、561nm 2. 根据分子的表达情况选择荧光抗体 PerCP≈APC-Cy7≈FITC PerCP-Cy5.5PE APC = PE-Cy5 弱表达：高荧光强度荧光素标记的抗体 3. 考虑荧光抗体间补偿的多少 4. 设置必需的对照 同型对照、各抗体单染 Biomedical Analysis Center 发射光谱交叠图例 局限性：可同时检测的分子种类有限 Biomedical Analysis Center 基本原理： 传统流式细胞术与原子质谱法相结合 过渡元素的同位素标记抗体 流式细胞仪产生单细胞液滴，原子质谱检测每个细胞上同位素的数量、种类 理论上可同时检测单细胞上/细胞内的100种以上的分子 流式细胞术研究进展 基本原理： 过渡元素 基本原理： Biomedical Analysis Center 基本原理： 质谱流式细胞术获得的细胞树状结构图 圆点：表达分子种类 相同的细胞 圆点大小：细胞数目 相邻圆点：表达分子 种类相近 颜色：分子表达强弱 Biomedical Analysis Center 优点： 理论上可检测单细胞的100种以上的分子 无需繁琐的荧光补偿 细胞群的解析更清晰、信息量更大 缺点： 细胞被破坏，不能进行细胞分选 灵敏度没有某些荧光燃料高 * * 贾正才 副教授 TEL:E-mail: zcjia2000@ 生物医学分析测试中心 Biomedical Analysis Center Flow Cyto metry in motion cell measure 对处在液流中的细胞或