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……………………………………………………………………………………………………………………………………… 宝日医生物技术（北京）有限公司 技术咨询电话 网址： 4006518761 4006518769 TaKaRa LA Taq? with GC Buffer Code No. RR02AG 包 装 量：125 Units 制品内容 TaKaRa LA Taq（5 U/μl） 125 units 2×GC Buffer I（5 mM Mg2+ Plus） 1.25 ml 2×GC Buffer II（5 mM Mg2+ Plus） 1.25 ml dNTP Mixture（2.5 mM each） 400 μl 贮存溶液 Tris-HCl（pH8.0） 20 mM KCl 100 mM EDTA 0.1 mM DTT 1 mM Tween 20 0.5% Nonidet P-40 0.5% Glycerol 50% 活性定义 用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在 74℃，30 分钟 内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个活性 单位（U）。 活性测定反应液组成 25 mM TAPS (pH9.3, 25℃) 50 mM KCl 2 mM MgCl2 0.1 mM DTT 200 μM each dATP·dGTP·dCTP 100 μM [3H]-dTTP 0.25 mg/ml activated salmon sperm DNA 纯 度 10 U 的本酶和 0.6 μg 的λ-Hind III、0.6 μg 的 Supercoiled pBR322 DNA或 0.6 μg的λ DNA在 74℃下反应 1 小时，均未检 出内切酶和外切酶活性。 PCR产物 使用本制品扩增得到的大部分 PCR产物 3’端附有一个“A”碱基， 因此可直接克隆于 T-Vector中。但克隆片段过长（大于 5 kb）， TA 克隆效率将会降低。也可以将 PCR 产物进行末端平滑化和磷酸 化后克隆到平滑末端载体中。 用 途 PCR法扩增 DNA。适用于高 GC含量或含有重复序列片段的扩增。 PCR反应性能 1） 以人基因组 DNA 为模板，可很好地扩增 17.5 kb（β-Globin gene）的 DNA片段（使用 GC Buffer I）。 2） 以人基因组 DNA为模板，可很好地扩增 c-jun proto oncogene 1,255 bp（GC含量 65％）的DNA片段（使用GC Buffer I，II）。 PCR反应液配制（共50 μl） TaKaRa LA Taq（5 U/μl） 0.5 μl 2×GC Buffer I or II* 25 μl dNTP Mixture（2.5 mM each） 8 μl Template 1 μg 引物 1 0.2 - 1.0 μM (final conc.) 引物 2 0.2 - 1.0 μM (final conc.) 灭菌水 up to 50 μl *： 该产品附带有两种反应Buffer。请先使用Buffer I，当使用Buffer I不能扩增时，再试用Buffer II。 PCR反应条件 以人基因组DNA为模板扩增1,255 bp（GC含量65％）的DNA片段。 反应条件如下： 94℃ 1 min. 94℃ 30 sec. 60℃ 30 sec. 72℃ 2 min. 72℃ 5 min Cool Start法 这种冷启动法（Cool S