TaKaRaExTaq.pdfVIP

……………………………………………………………………………………………………………………………………… 宝日医生物技术（北京）有限公司 技术咨询电话 网址： 4006518761 4006518769 TaKaRa Ex Taq? Code No. RR001Q 包 装 量：50 Units 附带试剂： 10×Ex Taq Buffer（20 mM Mg2+ Plus） 1 ml dNTP Mixture（2.5 mM each） 180 μl 贮存溶液 Tris-HCl（pH8.0） 20 mM KCl 100 mM EDTA 0.1 mM DTT 1 mM Tween20 0.5% Nonidet P-40 0.5% Glycerol 50% dNTP Mixture 可直接用于 PCR，无需稀释。 浓 度：每种dNTP为2.5 mM 状 态：水溶液（钠盐，pH7～9） 纯 度：每种 dNTP≥98% 活性定义 用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在 74℃、30 分钟 内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个活性 单位（U）。 活性测定反应液组成 25 mM TAPS (pH9.3，25℃) 50 mM KCl 2 mM MgCl2 0.1 mM DTT 200 μM each dATP·dGTP·dCTP 100 μM [3H]-dTTP 0.25 mg/ml activated salmon sperm DNA 纯 度 10 U 的本酶和 0.6 μg 的λ-Hind III、0.6 μg 的 Supercoiled pBR322 DNA或 0.6 μg的λ DNA在 74℃下反应 1 小时，均未检 出内切酶和外切酶活性。 用 途 PCR法扩增 DNA。 PCR产物 使用本制品扩增得到的大部分 PCR产物 3’端附有一个“A”碱基， 因此可直接克隆于 T-Vector 中。也可以在末端平滑化和磷酸化后 克隆到平滑末端载体中。 PCR性能 1） 以λ DNA 为模板，可以很好地扩增 20 kb的 DNA 片段。 2） 以人基因组 DNA 为模板，可很好地扩增 17.5 kb（β-Globin gene）的 DNA片段。 PCR反应液组成（共 50 μl） TaKaRa Ex Taq（5 U/μl） 0.25 μl 10×Ex Taq Buffer（Mg2+ Plus） 5 μl dNTP Mixture（各 2.5 mM） 4 μl Template 500 ng 引物 1 0.2 - 1.0 μM (final conc.) 引物 2 0.2 - 1.0 μM (final conc.) 灭菌水 up to 50 μl PCR反应条件 扩增 1 kb DNA片段的 PCR反应条件如下： 98℃ 10 sec. 55℃ 30 sec. 30 Cycles 72℃ 1 min. 或 98℃ 10 sec. 68℃ 1 min. 注） 变性条件根据使用的 PCR仪型号和反应管种类进行设定， 94℃时设定为 20～30 sec、98℃时设定为 5～10 sec。 Cool Start法 这种冷启动法（Cool Start Method）可增强 PCR 扩增的特异性， 减少 PCR 过程中的非特异性反应，能得到良好的 PCR 结果。该方 法操作简单，无需专门的酶或附加试剂。 Cool Start法操作过程 1、使用前将试剂置于冰上。 2、在冰上准备反应混合液*1，2。 ＊1：添加顺序不影响结果。 ＊2：混合液在反应前