帕金森病模型定稿解读.pptx

帕金森病动物模型 实验动物学：四组 组员：张鑫、赵向男、 张岩、李晓 2016.11.14 帕金森病又称震颤麻痹，是一种由于脑内黑质纹状体通路多巴胺缺乏所致的，在老年人中常见的进行性中枢神经系统退行性疾病。 此病主要病理特征为黑质多巴胺(DA)能神经元缺失及胞质内包涵体--路易小体(Lewy body)出现 主要 症状 静止性震颤 肌强直 运动迟缓 体位不平衡、步态紊乱 焦虑、睡眠障碍等非运动症状 脊髓前角 运动神经元 调节运动功能 黑质 纹状体 DA ACh 作用过程 正常 帕金森病 多巴胺 多巴胺 乙酰胆碱 乙酰胆碱 Jame Parkinson首先在1817年对帕金森病的临床表现进行了描述。当时，对PD的发病机制几乎一无所知。直到20世纪50年代Carlson等对啮齿类动物注射利血平后，使动物产生类似PD样症状，这是最早建立的PD动物模型。 ?PD动物模型的发展 随着对儿茶酚胺特异性神经毒素六羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)的认识，在1968年Vngerstedt等人成功地建立6-OHDA动物模型。之后，于1983年Brundin等报道了利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)制作小鼠和猴的PD动物模型。 在国内，周厚广等用两点注射法将6-OHDA注入大鼠一侧的黑质及内侧前脑束，成功率高达71.1%，电镜观察可见中脑黑质神经细胞普遍存在变性坏死及不同阶段的凋亡改变，可以较快地建立稳定地成功率较高的类似于人类中晚期帕金森病行为和病理的大鼠模型。随着研究的深入，相继出现了NO、Fe3+及机械损伤的PD动物模型，根据研究目的的不同，选择不同的PD动物模型。 帕金森病动物模型的制备 为模拟人类PD，理想的动物模型应具备以下一些特点： （1）多巴胺能神经元在出生时数量及形态正常，青年时期开始逐渐选择性地减少，减少量超过50％，且容易通过神经化学和神经生理学的方法检测到； （2）模型应能容易检测其运动功能的损伤，包括运动迟缓、肌僵直和静止性震颤等PD的主要症状； （3）模型应能显示出路易小体的形成； （4）如果模型是遗传性的，应基于单一突变而使突变模型有着强大的传播能力； （5）模型应有相对较短的疾病周期（如数月），以使药物筛选得以经济、快速地进行。 ??? ①通过在大鼠的黑质或内侧前脑束注射6羟多巴胺（6-OHDA） ②通过对模型动物(如:猴、小鼠、猪等)进行1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）的管饲法和立体定位注射等方法 国际通用国内应用较多是两种方法： 模型制备方法 前者是较精典的模型制备的方法，也是在国内较早开展的，但是由于神经元的毁损出现的较早，这与临床PD病人的中脑黑质多巴胺能神经元的渐进性死亡不同； 近距离的毁损很难把握毁损的程度，这使得采用这种方法获取部分损毁的模型的成功率很低； 存在的问题 较之前者采用MPTP管饲法和立体定位注射方法，在国内最近几年才运用到帕金森动物模型的制备，国外已经利用MPTP在猴和小鼠身上建立了较为理想的PD模型，制备通常采用皮下、静脉、腹腔注射和肌肉给药，具有方法可靠且重复性较好。但是其危险性较高，对于试验人员和试验条件有着严格的要求 模型制备 应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型 应用MPTP制备PD动物模型 其它建模方法 应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型 1）雄性Sprague-Dawley大鼠，体重230～250g 2）戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后，固定于立体定向仪 3）参照大鼠脑立体定位图谱,取两个靶点，将12μg 6- OHDA立体定向注射于右侧黑质a、b两个靶点(每点 注射量6μg，浓度2μg／μl，溶解于含0.1%抗坏血酸 的生理盐水中)。注射速度0.3μl／min．注毕留针 15min。 应用MPTP制备PD动物模型 灵长类PD模型 恒河猴戊巴比妥腹腔麻醉下，切开颈部皮肤，暴露一侧颈总动脉。将新鲜配制的MPTP按1.0～1.5mg／kg体重溶于2mL生理盐水中，逆血流方向缓慢注入血管中。若动物在第1次手术后PD症状不明显，分别在每隔5d后又给予第2～4次注射，直至PD症状出现。 小鼠PD模型 小鼠对MPTP的敏感性存在种系和年龄的差异。一般选10~12周龄，体重25~30g成年C57BL褐鼠，按体重30~40 mg／kg腹腔注射MPTP，连续7d。于第6~7次注射后出现暂时性(2~3h)躯干震额、竖毛、尾巴过伸、动作减少及爬杆试验障碍 利血平主要可以通过抑制去甲肾上腺素能神经元末梢的再摄取功能，使囊泡内贮存的多巴胺(DA)及其他的儿茶酚胺类递质耗竭。将雄性Wistar大鼠(体重280—300