VE含量测定解析.ppt

（一）铈量法 1、原理： VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地 氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。 终点：亮黄→灰紫;空白试验. 2、反应条件 （1）VE在H2SO4酸性条件下水解为宜。 碱性溶液中游离生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中进行,如在碱性中会生成碱式盐而影响测定。 （2）Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,α-生育酚溶于酸而不溶于水, 滴定过程中应有一定浓度的乙醇。 （3）本法适用于纯度高的VE供试品。 （二）气相色谱法 1、色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：2m×4mmI.D.硼硅玻璃柱， 内装硅藻土（80-100目）或高分子多孔小球 固定相：硅酮（OV-17） 涂布浓度 2%的填充柱 固定液→100%二甲基聚硅氧烷 毛细管柱 载气：N2， 流速:含2%固定相：以18-20分钟为宜；含5%固定相：以30- 32分钟为宜 柱温：265℃ 内标：正三十二烷 检测器：FID（氢火焰离子化检测器） 4、溶液配制： 内标溶液：正三十二烷的环己烷溶液（1.0mg/ml） 对照溶液：对照品溶解于内标溶液中 (1mg/ml) 供试品溶液：供试品约50mg，用内标溶液，溶解并稀释至50ml (二)HPLC—用外标法可以测定dl–α–生育酚 1、色谱条件： ★色谱柱：内径4mm,长15～30Cm的不锈钢柱;填充以粒径5～l0μm的十八烷基硅烷键合硅胶固定相 ★流动相：甲醇-水 (49:1) ★紫外检测器;波长为292nm ★维生素E比醋酸维生素E先出峰，且二峰的分离度应大于2.6。 ★需做重现性试验，即重复试验3次，峰高的相对标准偏差小于0.8%。 2、测定方法： 取供试品液和对照品液各20μl注入高效液相色谱仪中，记录峰高HX和Hr 3、计算： 供试品中维生素E的量mx(mg)= 式中：mr—为生育酚对照品的量， Hx、Hr—为生育酚供试品、对照品中检测得峰高。 4、样品液的制备:样品测定管U、标准管S、空白管B 5、测定方法：测定Fu、Fs、Fb 6、计算： 维生素E含量测定 应该采用何种方法？ 根据化学性质： 1.可被硫酸铈定量氧化. ——铈量法 2.三氯化铁反应——生成的亚铁离子作用形成有色结合物间接测定（三氯化铁—2，2’—联吡啶比色法） [检查方法] 取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，根据消耗硫酸铈滴定液的量来进行计算 紫外分光光度法 [原理]: 维生素E在碱性溶液中加热水解生成游离生育酚，并被三氯化铁氧化为对生育醌，同时生成亚铁离子。后者与联吡啶生成血红色的配离子，再进行比色测定。 但由于操作麻烦，专属性不高，又容易有干扰，现已被GC取代。 生育酚 [O] 对-生育醌 含量测定 根据物理化学性质： 1.紫外分光光度法: ——不适用 2.色谱法 方法简便快速，专属性 强。 特别适用于多种维生素 制剂中维生素E的测定。 3、荧光分光光度法 ★ 气相色谱法(ChP) 六十年代起开始研究维生素E的气相色谱法。 GC特点 选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好 气相色谱法(GLC)测定维生素E的优点 可分离维生素E、其异构体及杂质，可选择性地测定维生素E 。适宜测定纯度不高的维生素E及维生素E制剂。 中国药典测定维生素E及维生素E制剂均采用气相色谱法。 3、供试品测定 f ×Ax ×Ms As Ax：供试品峰面积 F：校正因子 As:内标物的峰面积 2、系统适用性试验： n ≥ 500（按维生素E计算） R≥2 （维生素E与内标物 正三十二烷的分离度 ） mg= 内标法 供试液（样品+内标） 内标物 对照液（对照+内标） 是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离 与被测组分的量接近 ★定量法: 内标法加校正因子 1 K A A = 内 对 2 K A A = 内 样 实际工作中的计算方法 本品含C31H52O3应为 96.0 ~ 102.0% 维生素E的荧光分光光度法 同步扫描直接（内源）荧光法 [原理]： 维生素大多含有芳香环结构（大的共轭?键结构），本身具有较